[發明專利]水稻褐飛虱主效基因qBph30(t)的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201410500123.1
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104328168B
• 公開（公告）日: 2017-02-22
• 發明（設計）人: 李容柏;邱永福;覃寶祥;焦曉真;楊萌;薛艷霞;劉芳
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 王正茂

技術領域

本發明屬于植物分子遺傳學領域，具體涉及水稻抗褐飛虱主效基因qBph30(t)的分子標記及其在選育水稻抗褐飛虱品種中的應用。

背景技術

稻褐飛虱(Nilaparvata?lugens簡稱BPH)屬于同翅目飛虱科(Homoptera:Delphacidae)昆蟲，是水稻種植過程中最主要的蟲害之一。它具有刺吸式口器，直接刺穿植株的維管束韌皮部攝取汁液中的可溶性糖類、無機鹽離子和氨基酸等營養物質，阻礙水稻植株正常生長，嚴重時整株死亡且顆粒無收，被稱為“飛虱火燒”；同時蟲體做為病菌的媒介，傳播多種水稻病害，如病毒病、齒葉矮縮病和草叢矮縮病等。從20世紀50年代開始褐飛虱對我國水稻生產為害的程度逐漸加劇，為害地域由南方水稻生產區域向北方擴展。據中國農業年鑒統計數據，在1966、1969、1973、1977、1983等年份大爆發，而在1987、1991、2003、2005、2006和2007年這幾年中我國水稻種植區發生全國性稻飛虱(主要是褐飛虱)爆發，超過50％以上的水稻種植面積受到稻褐飛虱危害，對我國的水稻糧食生產安全造成嚴重的威脅。

目前，使用化學殺蟲劑來控制褐飛虱危害是農業生產中最主要的防治方法，這種方法不僅加大了水稻生產成本，并且殺死褐飛虱天敵，容易引起褐飛虱的再爆發，同時對土地、水體等生態因素造成污染，以及生物鏈中毒性的累積和相應的人類健康問題；而利用寄主植物的抗性基因，培育并推廣種植抗褐飛虱水稻品種是防治褐飛虱最為經濟有效和環境友好的方法。從早期的抗褐飛虱水稻品種Mudgo開始，研究人員培育了一批抗褐飛虱的品種(系)，如IR26、IR36、IR56和IR64等，這些抗蟲品種的推廣對控制褐飛虱的危害起到了一定效果；但是，大面積推廣抗褐飛虱水稻品種引起了褐飛虱生物型的演變，攜帶抗性基因的水稻品種會逐步喪失對褐飛虱的抗性。在新培育品種中引入抗性更強的基因或聚合多個抗性基因的方式可以提高水稻品種的抗性水平和延長抗性持續的時間。由此也就需要挖掘更多新的抗褐飛虱種質資源，到2013年為止，在水稻中已報道了超過35個以上抗性位點，其中超過28個抗褐飛虱主效基因被定位。目前分子標記輔助選擇(MAS)已經與傳統雜交方法結合應用于抗褐飛虱水稻品種的培育，通過基因聚合途徑來提高水稻對褐飛虱的抗性既可出于經濟考慮，而且在生態和進化方面可能也有很重要的價值。

本研究利用構建的雜交后代群體，對抗源05BPH16材料進抗褐飛虱基因的定位，獲得與抗性基因緊密連鎖的分子標記，為水稻抗蟲分子育種提供抗源及有實際應用價值的分子標記，可以有目的地進行抗蟲基因的導入和聚合，以保證在水稻抗蟲育種中使用多樣化的抗性資源，培育含有不同抗性基因的品種或含有多個抗性基因的品種以長期抵御不同生物型的褐飛虱群體。

發明內容

本發明的目的之一是提供水稻抗褐飛虱主效基因qBph30(t)的一種分子標記。

本發明的目的之二是提供上述分子標記的檢測方法。

本發明的目的之三是提供的上述分子標記在選育抗褐飛虱水稻中的用途。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

水稻抗褐飛虱主效基因qBph30(t)的分子標記，其由下列引物對經PCR擴增獲得，所述引物對的上游引物為Seq?ID?NO.1所示的序列，所述引物對的下游引物為Seq?ID?NO.2所示的序列；

Seq?ID?NO.1：5’-AGCCCAAATGGAACAAACAA-3’

Seq?ID?NO.2：5’-GCTCACGGTTAAGCAATGGT-3’。

本發明還提供了所述分子標記用于篩選水稻抗褐飛虱主效基因qBph30(t)的方法，包括步驟：以待檢測的水稻基因組DNA為模板，以權利要求1所述的引物對進行PCR擴增，如果引物能夠擴增出247bp的基因片段，說明待檢測的水稻存在抗褐飛虱主效基因qBph30(t)。

本發明公開了所述的分子標記對在水稻輔助育種中的用途。

另外，本發明還公開了一種篩選抗褐飛虱水稻品種的方法，其特征在于，使用權利要求1中所述的分子標記，以待檢測的水稻基因組DNA為模板進行PCR擴增，并判斷是否能擴增出247bp的基因片段，如果能擴增出所述247bp片段，則標志著該待檢水稻為存在抗褐飛虱主效基因qBph30(t)的抗性水稻材料。

作為優選，上述方法以待檢測的水稻基因組DNA為模板進行PCR擴增后，可以通過凝膠電泳檢測或測序的方式，判斷是否能擴增出247bp的基因片段。

本發明具備的有益效果