[發明專利]一種亞單位疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410500076.0
• 申請日: 2014-09-25
• 公開（公告）號: CN105497885B
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;金云云;田克恭
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/116
• 分類號: A61K39/116;A61P31/04
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發明提供了一種疫苗組合物，該疫苗組合物包括免疫量的豬巴氏桿菌抗原OmpA蛋白、OmpH蛋白和PlpE蛋白。該疫苗組合物種幾種蛋白抗原組合使用，協同刺激機體免疫反應，只需要免疫一次即可產生良好的保護作用，對不同血清型豬巴氏桿菌的混合感染有較好的保護作用。本發明還提供了該疫苗組合物的制備方法，通過基因工程手段對蛋白抗原進行大量表達產生，利于大規模生產。經試驗證明本發明的疫苗組合物可有效保護豬只抵抗不同血清型豬巴氏桿菌的混合感染，其應用對于提供一種完善預防和/或治療豬巴氏桿菌感染的途徑，和對于凈化豬巴氏桿菌有著積極的現實意義。

技術領域

本發明涉及一種亞單位疫苗，該疫苗的制備方法和應用，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

多殺性巴氏桿菌(Pasteurella multocida,Pm)屬于巴氏桿菌科巴氏桿菌屬多殺性巴氏桿菌種，是有莢膜的革蘭氏陰性短桿菌，兼性厭氧。根據其莢膜和脂多糖的不同，可將Pm分為A、B、D、E、F5個血清群和16個血清型，A型主要引起禽霍亂，B、E型主要引起出血性敗血癥，產毒素的D型主要引起豬萎縮性鼻炎。該病原菌在世界各地均有流行，宿主范圍較廣，可感染多種動物并引起發病，不同動物感染后發病癥狀和病理變化不盡相同。

豬的多殺性巴氏桿菌病多數是由Pm A、B、D血清型引起，非產毒素多殺性巴氏桿菌主要引發豬肺疫，又稱豬出血性敗血癥，俗稱“鎖喉風”。該病最急性型呈敗血癥癥狀，咽喉部急性腫脹，高度呼吸困難，犬坐姿勢，死亡迅速；急性型表現為纖維素性胸膜肺炎癥狀；慢性型多為慢性肺炎、胃腸炎以及逐漸消瘦，有時伴發關節炎。產毒素多殺性巴氏桿菌主要引起進行性豬萎縮性鼻炎，該病會導致豬鼻甲骨萎縮、鼻吻變形及全身骨骼發育受到影響，使豬的生長遲緩，容易繼發復合性肺炎，給養豬業造成巨大的經濟損失。

目前臨床上用于預防多殺性巴氏桿菌病的疫苗主要是滅活疫苗和弱毒活疫苗，滅活苗對巴氏桿菌不同血清型的交叉保護能力差、保護期短；弱毒活疫苗的免疫效果易受環境等因素的影響且存在毒力返強的風險。無論是滅活疫苗還是弱毒活疫苗，均需要多次重復免疫，面對異型菌株的攻擊，其保護功效是十分有限的。

發明內容

本發明的主要目的在于克服現有技術缺陷，提供一種用于預防和/或治療豬多殺性巴氏桿菌病的疫苗組合物，包含三種豬巴氏桿菌免疫保護性抗原和佐劑。

本發明的第一方面包括一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的豬巴氏桿菌抗原OmpA蛋白、OmpH蛋白和PlpE蛋白。

本發明采用大腸桿菌表達的OmpA、OmpH及PlpE蛋白制備豬巴氏桿菌亞單位疫苗，對豬巴氏桿菌不同血清型提供全面的保護；使用吸收效果好的新型水溶性佐劑，避免免疫局部出現不良反應，提高免疫應答及對豬的免疫保護作用。

本發明首次通過將Pm的外膜蛋白OmpA蛋白、OmpH蛋白和PlpE蛋白組合使用，針對不同血清型豬巴氏桿菌感染有較好的保護作用，而且只需要免疫一次，避免多次重復免疫帶來的應激反應。通過免疫效力比較試驗，意外發現，幾種蛋白組合使用，協同刺激機體免疫反應，能夠有效降低免疫劑量，大大降低免疫成本。

本發明提供的預防和/或治療豬多殺性巴氏桿菌病的疫苗組合物包含的豬巴氏桿菌免疫抗原為P.multocida重組OmpA、OmpH、PlpE蛋白。

作為本發明的一種優選實施方式，本發明的疫苗組合物中，所述豬巴氏桿菌抗原OmpA蛋白的氨基酸序列為SEQ.NO.4,所述豬巴氏桿菌抗原OmpH蛋白的氨基酸序列為SEQ.NO.5,所述豬巴氏桿菌抗原PlpE蛋白的氨基酸序列為SEQ.NO.6。

優選地，本發明提供的預防和/或治療豬多殺性巴氏桿菌病的疫苗組合物包含的豬巴氏桿菌免疫抗原OmpA蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

優選地，本發明提供的預防和/或治療豬多殺性巴氏桿菌病的疫苗組合物包含的豬巴氏桿菌免疫抗原OmpH蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。