[發(fā)明專利]一種氨磺磷膠體金快速檢測試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410497145.7
• 申請日: 2014-09-25
• 公開（公告）號: CN104215767A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓志成
• 申請（專利權(quán)）人: 句容市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種氨磺磷膠體金快速檢測試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

氨磺磷(Famphur)是一種廣譜的有機磷殺蟲劑，用于防治貯藏谷物中的害蟲和各種葉類作物上的害蟲，也用來防治蚊成蟲、蠅類、水生幼蟲和衛(wèi)生害蟲。其作用機理是抑制乙酰膽堿酯酶的活性。乙酰膽堿是神經(jīng)遞質(zhì)，過量的乙酰膽堿過度刺激乙酰膽堿受體，導(dǎo)致靶生物死亡。然而，一些不是預(yù)定目標(biāo)的生物也遭到了毒害，包括人、魚等其他生物。

目前，對農(nóng)藥殘留的檢測方法主要是儀器分析方法和酶聯(lián)免疫分析方法(ELISA)等。儀器分析方法包括高效液相色譜法(High?performance?liquid?chromatography，HPLC)、氣相色譜法(Gas?chromatography，GC)、薄層色譜法(Thin?layer?chromatography，TLC)、液-質(zhì)串聯(lián)法(HPLC-MS)和氣-質(zhì)串聯(lián)法(GC-MS)等，這些儀器分析方法雖然可以達(dá)到較高的檢測靈敏度，但需要復(fù)雜昂貴的儀器設(shè)備及專業(yè)操作人員，加之樣品前處理繁瑣費時、檢測費用高，難以滿足快速、在線檢測的需要。ELISA(Enzyme?Linked?Immunosorbent?Assay)方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結(jié)果不夠直觀，不能在線進(jìn)行檢測等缺陷。因而ELISA方法的應(yīng)用受到很大的限制。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供了克服上述氨磺磷快速檢測技術(shù)的不足，研制出一種特異、敏感、快速、簡便的氨磺磷膠體金快速檢測試紙條。本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供了上述試紙條的制備方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種氨磺磷膠體金快速檢測試紙條，所述試紙條含有襯板和依次排列在襯板上的樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、纖維素膜和吸水墊，所述襯板為不吸水的韌性材料，所述的韌性材料用硬質(zhì)塑膠條或不吸水硬紙條制成，所述金標(biāo)結(jié)合墊內(nèi)吸附有氨磺磷金標(biāo)抗體，所述纖維素膜上有隱形檢測線和隱形對照線，所述隱形檢測線用氨磺磷半抗原偶聯(lián)的載體蛋白溶液印制，所述隱形對照線用兔抗鼠IgG抗體印制。所述吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙或濾油紙。所述隱形檢測線為直線式隱形檢測線，所述隱形對照線直線式隱形對照線，兩條線平行組合排列為“||”。

其中，上述氨磺磷金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的氨磺磷單克隆抗體。

其中，上述偶聯(lián)氨磺磷半抗原的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一種或幾種。

在試紙條的吸水墊上設(shè)有手柄端保護(hù)膜，在樣品墊上設(shè)有樣品浸入端保護(hù)膜。所述的保護(hù)膜為不透明的膠膜，樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊對應(yīng)的保護(hù)膜上印制有待測樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向樣品墊一側(cè)約0.5厘米處。

其中，上述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜中的一種或幾種制成。

其中，上述纖維素膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜中的一種或幾種。

上述氨磺磷膠體金快速檢測試紙條的制備方法包括以下步驟：

1)氨磺磷半抗原的合成；

2)氨磺磷半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到氨磺磷半抗原偶聯(lián)的載體蛋白溶液；

3)氨磺磷金標(biāo)抗體的制備；

4)金標(biāo)結(jié)合物墊的制備；

5)兔抗鼠IgG抗體的制備；

6)氨磺磷半抗原偶聯(lián)的載體蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗體包被纖維素膜；

7)試紙條的組裝。

所述步驟1)氨磺磷半抗原的合成方法如下：

①O-甲基-O-(對-二甲磺酰氨基苯基)硫代磷酰氯的合成：稱取對-二甲磺酰氨基苯酚4.2g用乙腈溶解；常溫下，將溶液逐滴加入20mL乙腈溶解的O-甲基硫代磷酰氯3.83g、粉狀K₂CO₃8.7g混合溶液，滴完后，繼續(xù)反應(yīng)1小時，反應(yīng)完畢后真空過濾，蒸去溶劑，得黃色油狀物，柱層析，用石油醚/二氯甲烷洗滌，蒸去溶劑得淡黃色油狀液體6.88g；

②氨磺磷半抗原：O-甲基-O-(對－二甲磺酰氨基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯的合成：稱取4-氨基丁酸0.54g、KOH?0.78g，溶解于6mL甲醇中，冰水浴冷卻至0-10℃，攪拌下緩慢加入溶解于6mL甲醇溶液的步驟①得到的淡黃色油狀液體1.38g，保溫反應(yīng)2小時，反應(yīng)完畢后，用石油醚/乙醚洗滌，水層調(diào)pH＝3.0后用乙醚提取，無水硫酸鈉干燥，蒸去溶劑，得淺黃色油狀物O-甲基-O-(對-二甲磺酰氨基苯基)-N-(丁酸)硫代磷酸酯1.28g。