[發明專利]一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的篩選方法

有效

• 申請號: 201410493799.2
• 申請日: 2014-09-25
• 公開（公告）號: CN104313119B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 何玉財;張丹平;陶志成;方月;郭飛;陳祎桐;李志青;高姍;陳建宇;王濤;劉廣泉
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的高通量篩選方法，其特征在于按照下述步驟進行：

（1）稱取紅球菌Rhodococcus?sp.?CCZU10-1靜息細胞（濕重）懸浮于磷酸緩沖溶液體系（pH?7.0，100?mmol/L），細胞終濃度為10%（質量濃度）；加入終濃度為100?mmol/L的底物外消旋β-羥基羧酸酯混合均勻后在30℃、160?r/min?的條件下進行氧化轉化反應；

（2）反應結束，利用等體積乙酸乙酯萃取萃取反應液；

顯色是在24孔板中進行的；

萃取上清液：顯色劑A（0.04?~?0.08?mol/L）：顯色劑B（0.1?~?0.3?mol/L）的體積比為20:800:800?(μL:?μL:?μL)，在20~35℃下顯色反應15~30?min后取200?μL反應液至另一24孔板中，加入9倍體積的無水乙醇混合均勻，用紫外-可見分光光度計測其在510?nm波長下進行分析。

2.根據權利要求1所述的一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的高通量篩選方法，其特征在于顯色劑A為FeCl₃、FeCl₂、Fe₂(SO₄)₃、FeSO₄、Fe(ClO₄)₃、CoCl₂或ZnCl₂中的一種。

3.根據權利要求1所述的一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的高通量篩選方法，其特征在于顯色劑B為HCl。

4.根據權利要求1所述的一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的高通量篩選方法，其特征在于顯色劑B為H₂SO₄。

5.根據權利要求1所述的一種β-羥基羧酸酯羥基氧化酶的高通量篩選方法，其特征在于顯色劑B為HClO₄。