[發(fā)明專利]一種分子探針及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410492083.0
• 申請(qǐng)日: 2014-09-24
• 公開（公告）號(hào): CN104447953B
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫毅毅;謝興亮;鐘玲;林東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K1/13;C12Q1/25
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明公開了一種分子探針，它是標(biāo)記了標(biāo)記基團(tuán)的多肽。本發(fā)明還公開了前述分子探針的制備方法和用途。本發(fā)明分子探針可以用于高通量篩選，相關(guān)蛋白譜的研究，靶標(biāo)蛋白的鑒別，結(jié)構(gòu)新穎、合理、制備方法簡(jiǎn)單，應(yīng)用前景良好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分子探針及其制備方法和用途。

背景技術(shù)

Cbl(Casitas B-lineage lymphoma)蛋白是一類在生物體內(nèi)廣泛分布的細(xì)胞內(nèi)蛋白，屬于泛素連接酶E3系。c-Cbl在細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)，但主要存在于細(xì)胞質(zhì)中。c-Cbl由N-端高度保守的酪氨酸激酶結(jié)合功能域(Tyrosine kinase binding domain，TKB)、環(huán)狀功能域(RING)、富含脯氨酸功能域、C-端與泛素結(jié)合(Ubiquitin-associated，UBA)的功能域及與之重疊的亮氨酸拉鏈功能域組成。c-Cbl分子中的TKB及其他功能域可以識(shí)別并結(jié)合靶蛋白，RING功能域負(fù)責(zé)募集泛素結(jié)合酶E2，從而啟動(dòng)泛素化降解途徑。c-Cbl通過調(diào)控信號(hào)蛋白參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)向調(diào)控，這對(duì)于維持細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)具有重要作用。

2型糖尿病(舊稱非胰島素依賴型糖尿病或成人糖尿病)，是一種嚴(yán)重的代謝性疾病，患者的主要特征為胰島素抵抗、相對(duì)胰島素缺乏和高血糖，常需要給予藥物或胰島素治療，但也可通過增加體育運(yùn)動(dòng)和膳食控制病情。在發(fā)達(dá)國(guó)家，近年來2型糖尿病患者數(shù)迅速增加，美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心已將2型糖尿病歸入流行病之一。2型糖尿病過去在40歲以上的成年人中發(fā)病，而今越來越多的未成年人也身患此病，其原因可能是由于該年齡段的高肥胖率所致，2型糖尿病常與肥胖、高血壓、高膽固醇(混合型高血脂癥)以及“代謝綜合征”(又稱X綜合癥、Reavan's綜合征、CHAOS綜合癥)相關(guān)，同時(shí)也與肢端肥大、柯興氏綜合征以及許多其他內(nèi)分泌疾病相關(guān)。2型糖尿病復(fù)雜且多因素的代謝改變常導(dǎo)致多個(gè)器官的損傷和功能損害，其中最重要的累及部位即是心血管系統(tǒng)，導(dǎo)致患者心血管疾病發(fā)病率和死亡率顯著上升，因此2型糖尿病已成為當(dāng)前嚴(yán)重的世界性問題并引起了眾多醫(yī)生以及科研人員的關(guān)注，特別是對(duì)胰島素的敏感度降低以及糖脂代謝的研究更是目前國(guó)際關(guān)注的熱點(diǎn)之一。在過去的幾十年里，一系列調(diào)控食欲、食物吸收以及增加肌肉組織或脂肪組織能量消耗的基因陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，其中c-Cbl基因就參與了全身能量消耗的調(diào)控。2004年Cooney GJ研究發(fā)現(xiàn)，c-Cbl在調(diào)控全身能量平衡中起著重要的作用。2006年，該組進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)證明c-Cbl通過調(diào)節(jié)胰島素敏感度參與了全身能量平衡的調(diào)控以及c-Cbl泛素連接酶E3功能域參與了身體能量平衡的調(diào)控。

綜上，c-Cbl蛋白功能域參與了機(jī)體能量平衡的調(diào)控，是潛在的治療代謝性相關(guān)疾病的藥物靶點(diǎn)，如果能成功設(shè)計(jì)出一類c-Cbl蛋白小分子探針，則將有助于鑒定和確證c-Cbl蛋白作為新的藥物靶點(diǎn)的可能性，有助于闡明c-Cbl的某些病理生理學(xué)意義，對(duì)于治療糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的新型藥物研發(fā)以及為靶向c-Cbl蛋白的藥物研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種可結(jié)合c-Cbl蛋白的小分子探針。

本發(fā)明分子探針，它是標(biāo)記了標(biāo)記基團(tuán)的多肽，多肽的氨基酸序列為pfKpp，其中，p為P或者P’，f為F或F’；

所述P’的結(jié)構(gòu)式為：其中，X為碳原子或雜原子，R為氫或鹵素；

所述F’的結(jié)構(gòu)式為：其中，R為C1-C4的烷基、鹵素、氨基、硝基或N₃。

標(biāo)記基團(tuán)：用來做標(biāo)記的物質(zhì)。

P：脯氨酸；F：苯丙氨酸；K：賴氨酸。

本發(fā)明的波浪鍵當(dāng)與立體中心連接時(shí)，波浪鍵表示兩種立體異構(gòu)體，單獨(dú)或者作為混合物；同樣，當(dāng)與雙鍵連接時(shí)，波浪鍵表示Z-異構(gòu)體、E-異構(gòu)體或者Z與E異構(gòu)體的混合物。

優(yōu)選地，所述多肽的氨基酸序列為PFKPP、P F’KPP、P’F’KPP、PF’KP’P或PF’KPP’。