[發(fā)明專利]一種草莓組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410490882.4
• 申請日: 2014-09-24
• 公開（公告）號: CN104186351A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡德龍;顏志明;王全智;譚曉燕;陸建蘭;蔡善亞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

發(fā)明領(lǐng)域

??本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種草莓組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

草莓作為應(yīng)時(shí)鮮果以其突出的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)功能在我國得到大面積的推廣種植。由于種植草莓多采用無性繁殖，容易感染多種病毒。主要是草莓斑駁病毒、草莓輕性黃邊病毒，草莓皺縮病毒和草莓鑲脈病毒，草莓病毒病給草莓生產(chǎn)造成嚴(yán)重的危害，使草莓減產(chǎn)，嚴(yán)重影響生產(chǎn)。

由于生產(chǎn)生活需要和現(xiàn)有的栽培條件限制，產(chǎn)量高、品質(zhì)好及抗性強(qiáng)的優(yōu)質(zhì)草莓脫毒苗的生產(chǎn)和育種困難。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種草莓組織培養(yǎng)方法，使得制備的草莓脫毒苗品質(zhì)好，成活率高，草莓的產(chǎn)量高。

技術(shù)方案：為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

步驟一、選擇外植體：

于5~6月份晴天的下午，取健壯、無病草莓植株剛抽出的匍匐莖莖尖，大小為0.3~0.4mm，作為組織培養(yǎng)的外植體莖尖；

步驟二、準(zhǔn)備培養(yǎng)基：

1）分化培養(yǎng)基：用于草莓莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)芽分化階段的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，附加6-BA?0.5mg/L，NAA?0.2mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂粉6.5g/L，并調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為5.8~6.0；

2）繼代培固體養(yǎng)基：用于草莓莖尖的擴(kuò)大繁殖階段的基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基附加6-BA?0.5mg/L、NAA?0.01mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為5.8~6.0；

3）誘導(dǎo)生根培固體養(yǎng)基：待幼苗長至2cm以上，即可切下單株轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基附加0.2mg/L的NAA，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為5.8~6.0；

步驟三、滅菌：

將步驟一中得到的組織培養(yǎng)的外植體莖尖用0.1%升汞水溶液浸泡莖尖8~10分鐘，并每隔2分鐘搖晃一次，完成滅菌；

步驟四、接種：

在培養(yǎng)室中，將步驟二中的培養(yǎng)基放置于培養(yǎng)瓶中，將步驟三得到的滅菌后的莖尖，轉(zhuǎn)移至步驟二中得到的分化培養(yǎng)基中；待愈傷組織長出小植株時(shí)，切取綠色部分且含有小苗的組織轉(zhuǎn)移至繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大繁殖階段；待幼苗長至2cm以上，即可切下單株轉(zhuǎn)移至誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中；上述的培養(yǎng)條件均為25±2℃,每日光照12小時(shí)，光強(qiáng)度2000Lx；

步驟五、組培苗移栽：

移栽前將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中取出置于自然條件下，打開瓶蓋進(jìn)行透氣煉苗；24小時(shí)后，從瓶中取出幼苗，清除根部及根頸處的培養(yǎng)基，并移栽至苗圃或穴盤中進(jìn)行馴化。

步驟二中，所述的培養(yǎng)基須用1~1.1個(gè)大氣壓熱壓滅菌20分鐘。

步驟三中，所述的滅菌后的莖尖，再用無菌水充分清洗3~5次，清除殘余的升汞。

步驟五中，所述的苗圃或穴盤中的基質(zhì)采用經(jīng)過滅菌處理的腐熟的鋸木屑或腐葉土，或采用經(jīng)過滅菌處理的由蛭石與珍珠巖按體積計(jì)以1：1比例配成的混合物，或采用園土與煤渣按體積計(jì)以2：1比例配制成的混合物。

所述的基質(zhì)要用清水沖洗干凈或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌；用煤渣作基質(zhì)時(shí)，還要用0.2%冰乙酸中和煤渣使堿性降低。

步驟五中，所述的小苗馴化時(shí)，放在溫室內(nèi)或塑料拱棚內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在15~20℃，濕度維持在80％。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的草莓組織培養(yǎng)方法，通過選擇升汞作為滅菌劑，殺菌能力較強(qiáng)，并且時(shí)間容易控制把握；通過選擇不定根直接生自莖基且多而粗壯，?3片葉以上且大而深綠的生根苗，使得成活率普遍較高；本方法不僅整體的操作過程較為簡單，實(shí)施起來較容易，而且能夠快速大量繁殖草莓脫毒苗，具備很好的實(shí)用性。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。

一種草莓組織培養(yǎng)方法，由以下步驟來完成：步驟一，外植體選擇；步驟二，培養(yǎng)基準(zhǔn)備；步驟三，滅菌；步驟四，接種；步驟五，組苗移栽。

在步驟一中，于5~6月份晴天的下午，取健壯、無病草莓植株剛抽出的匍匐莖莖尖，大小為0.3~0.4mm，作為組織培養(yǎng)的外植體。