[發(fā)明專利]一種重組菌絲霉素及其表達純化的方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410487066.8
• 申請日: 2014-09-22
• 公開（公告）號: CN104262471B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 陳新;李凌;史家瑋;溫耀安;石羽;余楠
• 申請（專利權）人: 陳新
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種菌絲霉素，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?1所示。

2.一種重組菌絲霉素，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種重組載體，其特征在于：其為含有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列的pE-SUMO重組載體。

4.一種重組菌，其特征在于：其含有權利要求3所述的重組載體。

5.一種重組菌絲霉素的表達和純化的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）取權利要求4?所述的重組菌，增殖培養(yǎng)，誘導表達培養(yǎng)，離心，得菌體；

2）取步驟1）所得菌體，裂解，離心，得裂解上清液；

3）將上述上清液進行使用Ni-NTA親和層析純化，即得重組菌絲霉素。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟1）中，所述重組菌為重組大腸桿菌BL21(DE3)，培養(yǎng)基為LB?培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)的條件是37℃、180?r/min?振蕩培養(yǎng)至OD₆₀₀為0.5。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟1）中所述誘導表達培養(yǎng)的條件是30℃、180?r/min?振蕩培養(yǎng)6h，使用的誘導劑是濃度為0.05mM的IPTG。

8.根據權利要求5?所述的方法，其特征在于：步驟2）中所述裂解為冰浴超聲破碎，破碎條件為工作時間5s，間歇時間5s，功率400W，工作時間20min。

9.根據權利要求5?所述的方法，其特征在于：步驟3）中所述純化的具體步驟為：每5mL?Ni-NTA樹脂用50ml?NTA20平衡后，與上清液混合，4?℃搖動結合1?h后；再將Ni-NTA樹脂裝入層析柱，流速為2mL/min；使用pH?7.4磷酸鹽緩沖液以流速2?mL/min洗滌；用咪唑濃度為500mmol/L的含0.1%Tween20的?pH7.4磷酸鈉洗脫液洗脫，FPLC自動收集洗脫液。

10.一種菌絲霉素的表達和純化的方法，其特征在于：將權利要求5～9任一獲得的重組菌絲霉素經酶SUMOpro酶切，透析，即可，所述透析用截留分子量為3kDa的透析袋進行透析。