[發(fā)明專利]緩釋氯己定無定形磷酸鈣納米顆粒的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410486872.3
• 申請(qǐng)日: 2014-09-22
• 公開（公告）號(hào): CN104856889B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓冰;蔡雪;李小曼;朱浚鑫;田福聰;王曉燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K6/033
• 分類號(hào): A61K6/033;A61K6/087
• 代理公司: 北京銀龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11243
• 代理人: 許靜,黃燦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種負(fù)載氯己定的無定形磷酸鈣納米顆粒及其制備方法，特別涉及一種可用于保護(hù)牙本質(zhì)I型膠原，促進(jìn)其再礦化的負(fù)載氯己定無定形磷酸鈣納米顆粒的制備方法。

背景技術(shù)

粘接酸蝕牙本質(zhì)或累及牙本質(zhì)的齲壞均存在暴露的膠原纖維被基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)破壞的問題，這將導(dǎo)致粘接界面和牙本質(zhì)的破壞。研究者們不斷試圖通過仿生礦化手段促進(jìn)暴露的膠原纖維再礦化，使足夠小的羥基磷灰石晶體替換膠原纖維網(wǎng)纖維內(nèi)外的水分，避免膠原纖維的暴露和酶解。無定形磷酸鈣是羥基磷灰石形成過程中的一種無定形中間相，存在于牙本質(zhì)形成的初始階段。通過這一中間相的轉(zhuǎn)變，生物體可以克服經(jīng)典晶體成核需要的能壘，從而更為高效地合成羥基磷灰石。研究表明，無定形磷酸鈣及其復(fù)合材料無細(xì)胞毒性，生物活性良好、細(xì)胞黏附性高，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、提高堿性磷酸酶活性并促進(jìn)骨橋蛋白的合成，目前廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，包括用于骨科材料、組織工程支架、釋藥載體等。然而膠原纖維再礦化過程緩慢，礦化過程中膠原纖維容易被持續(xù)作用的MMPs破壞，使再礦化過程缺乏模板而失敗。氯己定是最常被研究的MMPs抑制劑，可以有效防止膠原纖維降解，只是目前研究大多使用氯己定溶液，無法長(zhǎng)期有效發(fā)揮作用。

為此，本發(fā)明擬將上述兩種問題結(jié)合，通過制備負(fù)載氯己定的無定形磷酸鈣納米顆粒，期望實(shí)現(xiàn)氯己定的緩釋，從而實(shí)現(xiàn)牙本質(zhì)再礦化過程中長(zhǎng)期有效保護(hù)膠原纖維，提高再礦化的時(shí)效性。所用設(shè)備簡(jiǎn)單，方法易行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種負(fù)載氯己定無定形磷酸鈣納米顆粒的制備方法，產(chǎn)物尺寸小，外形為較規(guī)則的球形，長(zhǎng)效釋放氯己定和鈣磷離子，并能隨pH降低加快釋放鈣磷離子的速度，可能應(yīng)用于口腔直接粘接修復(fù)材料領(lǐng)域。

牙本質(zhì)膠原纖維仿生礦化過程中，膠原纖維易受到MMPs酶的降解，導(dǎo)致膠原纖維仿生礦化失敗。氯己定可以抑制MMPs酶的活性，從而保護(hù)膠原纖維。本發(fā)明通過研制負(fù)載氯己定的無定形磷酸鈣納米顆粒，提高牙本質(zhì)仿生礦化的時(shí)效性。

本發(fā)明的方法特點(diǎn)是可以在仿生礦化過程中，利用氯己定保護(hù)膠原纖維，使膠原纖維仿生礦化得以順利進(jìn)行。

本發(fā)明的緩釋氯己定無定形磷酸鈣納米顆粒(也稱無定形磷酸鈣納米球)。本發(fā)明以可溶性鈣鹽和可溶性磷酸鹽作為鈣磷源，包覆醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定，以聚丙烯酸作為穩(wěn)定劑，以非離子表面活性劑囊泡為模板制得所述無定形磷酸鈣納米顆粒。具體的，本發(fā)明的方法包括下述步驟：

1)制備含氯己定的非離子表面活性劑囊泡懸浮液；

2)在攪拌下，在步驟1)制備的非離子表面活性劑囊泡的懸浮液體系中加入可溶性鈣鹽溶液和磷酸鹽溶液，反應(yīng)得到無定形磷酸鈣納米顆粒的懸浮液；

3)在所述步驟2)得到的磷酸鈣納米顆粒的懸浮液中加入不同濃度穩(wěn)定劑，攪拌均勻，然后離心得到沉淀，將沉淀洗滌、真空干燥得到無定形磷酸鈣納米顆粒。

本發(fā)明原理首先通過調(diào)整制備過程中氯己定溶液的濃度，得到不同載藥量的負(fù)載氯己定無定形磷酸鈣納米顆粒，以期實(shí)現(xiàn)氯己定在膠原纖維再礦化過程中的持續(xù)保護(hù)作用。其次，超聲形成的納米尺寸非離子表面活性劑囊泡能夠作為模板，輔助磷酸鈣包覆氯己定，之后去除模板，得到納米顆粒。

所述步驟1)中，所述含氯己定的非離子表面活性劑囊泡的懸浮液中，所述氯己定的質(zhì)量百分濃度為2-20％；可根據(jù)所需載藥量進(jìn)行調(diào)整。

所述步驟1)中，制備非離子表面活性劑囊泡的懸浮液的方法包括制備含有非離子表面活性劑(如Span80或Tween80)、氯己定(不同濃度的醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定)和聚乙二醇的溶液，超聲得到納米尺寸非離子表面活性劑囊泡的懸浮液；所述非離子表面活性劑為Span80或Tween80；所述氯己定為醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定。所述氯己定與Span80或Tween80的重量比不限。

所述步驟1)中，所述超聲步驟的條件為20-25℃，30-50KHz超聲10-30分鐘；所述超聲步驟的條件優(yōu)選20-25℃，40KHz超聲30分鐘。所述含有非離子表面活性劑，氯己定和聚乙二醇的溶液中，非離子表面活性劑的濃度為0.10-0.20g/mL，優(yōu)選0.20g/mL，聚乙二醇的濃度大于0.01g/mL，優(yōu)選0.01g/mL。所述含有非離子表面活性劑、氯己定和聚乙二醇的溶液以緩沖溶液為溶劑配制，所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液；所述緩沖溶液優(yōu)選為pH為8.0、0.5mol/L的Tris-HCI緩沖液。

所述步驟2)中，所述鈣鹽溶液和磷酸鹽溶液的添加，鈣、磷元素摩爾比為1～2，優(yōu)選1.3：1。