[發明專利]一種茶藨子木層孔菌多糖及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410484913.5
• 申請日: 2014-09-22
• 公開（公告）號: CN104292351A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 劉玉紅;周洪雷;蔣海強;徐凌川
• 申請（專利權）人: 山東中醫藥大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P25/28
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

1.一種茶藨子木層孔菌多糖，其特征在于，其單糖組成為β-D-葡萄糖，其結構中有可重復單元結構；所述可重復單元結構由3個(1→3)-β-D-葡萄糖構成主鏈，在主鏈的其中一個(1→3)-β-D-葡萄糖的C6位有一個分枝，分枝由3個(1→6)-β-D-葡萄糖串聯而成，其重復單元結構式如下：

。

2.根據權利要求1所述的茶藨子木層孔菌多糖，其特征在于，所述茶藨子木層孔菌多糖中末端葡萄糖、(1→3)-?β-D-葡萄糖、(1→6)-?β-D-葡萄糖和(1→3，6)-?β-D-葡萄糖的組分摩爾比約為1:2:2:1；所述的茶藨子木層孔菌多糖，重均分子量為5.16×10³Da。

3.一種權利要求1所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：

（1）水提：取茶藨子木層孔菌子實體粗粉，加20倍-40倍重量的蒸餾水，90℃-100℃提取4次，每次4h-6h，濾過，合并濾液，濃縮，加乙醇至含醇量80%，靜置24h，離心，得茶藨子木層孔菌總多糖粗品；

（2）去蛋白：將步驟（1）所得的總多糖粗品溶于蒸餾水中，用蛋白酶酶解，滅活并離心除去變性蛋白酶，離心所得上清液加入有機溶劑，振蕩，離心，除去下層有機相和中間蛋白層，重復有機溶劑處理的步驟直至無白色沉淀產生，得到去蛋白后的多糖水提液；

（3）分級醇沉：將步驟（2）中的水提液濃縮，加乙醇至含醇量50%，離心，棄去沉淀物，上清液繼續加乙醇至含醇量80%，靜置，離心，沉淀物依次用無水乙醇、丙酮洗滌，真空干燥，得茶藨子木層孔菌分級多糖粗品；

（4）柱層析：將步驟（3）得到的茶藨子木層孔菌分級多糖粗品溶解后經DEAE-纖維素柱層析，苯酚-硫酸法檢測多糖，收集第二洗脫峰的洗脫液后將其再經凝膠柱層析，苯酚-硫酸法檢測多糖，收集主峰的洗脫液，洗脫液經濃縮、透析和凍干后得到本發明的茶藨子木層孔菌多糖。

4.根據權利要求3所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述離心速度為3000rpm-4000rpm，時間為15min-30min。

5.根據權利要求4所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，加入茶藨子木層孔菌30倍重量的蒸餾水，提取溫度為95℃，提取時間為每次6h，離心速度為3000rpm，離心時間為20min。

6.根據權利要求3所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，所述蛋白酶為胰蛋白酶；所述有機溶劑為氯仿和正丁醇，所述氯仿和正丁醇的體積比為5：1。

7.根據權利要求3所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述乙醇為無水乙醇；離心速度為3000rpm，離心時間為20min。

8.根據權利要求3所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，所述DEAE-纖維素柱層析的條件為：分步洗脫，洗脫液依次為蒸餾水、0.05mol/L?NaCl溶液、0.1mol/L?NaCl溶液和0.2mol/L?NaCl溶液，流速為2ml/min。

9.根據權利要求3所述的茶藨子木層孔菌多糖的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，所述的凝膠為Superdex?30，凝膠過濾層析條件為：洗脫液為0.05mol/L?NaCl溶液，流速為0.5ml/min。

10.一種權利要求1所述的茶藨子木層孔菌多糖在制備治療神經退行性疾病的藥物中的應用。