[發(fā)明專利]一種北纈草組織培養(yǎng)繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410482874.5
• 申請日: 2014-09-22
• 公開（公告）號: CN104304004B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張鑫;宋經(jīng)元;辛天怡;陳士林
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及敗醬科纈草屬藥用植物北纈草(Valeriana?fauriei?Briq.)組織培養(yǎng)繁殖方法。

背景技術(shù)

北纈草(Valeriana?fauriei?Briq.)為敗醬科Valerianaceae纈草屬(Valeriana)野生多年生草本植物。纈草性平味辛，具有鎮(zhèn)靜安神、解痙止痛的功效，根莖被作為鎮(zhèn)靜藥應(yīng)用已有上千年。北纈草為纈草屬植物中的代表，分布于東北地區(qū)(黑龍江、吉林、遼寧)和華東地區(qū)(江蘇、安徽、浙江、江西、臺灣)，并西向河南、陜西等地延伸。北纈草生于海拔2000m以下的山坡草甸、林間濕地、林緣路旁。目前，北纈草的藥理作用、化學(xué)成分已得到不同程度的研究。有關(guān)北纈草專利產(chǎn)品的報導(dǎo)日益增多，該植物的藥用價值已受到高度重視。我國大興安嶺地區(qū)野生北纈草資源較豐富，但過度開發(fā)利用對資源及環(huán)境造成破壞。而目前我國對于北纈草資源保護(hù)的研究尚處于起步階段，僅少量研究報道。

在我國，對于北纈草的獲取主要還是依賴于野生北纈草資源。然而，野生北纈草種子多數(shù)不育，自然發(fā)芽率較低，人工變溫處理催芽，發(fā)芽率最高僅為50％。此外北纈草種子細(xì)小，人工收集費(fèi)時費(fèi)力，且大田栽培生產(chǎn)周期較長，占用耕地，易受氣候、病蟲害的影響。利用根莖移栽雖成活率高，但繁殖系數(shù)低，在大規(guī)模栽培種不適用。利用生物技術(shù)進(jìn)行中藥資源快速繁殖并實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)已成為一個新的發(fā)展方向。目前，對于纈草屬植物的組培研究還很少，有利用子葉無菌條件下誘導(dǎo)芽簇的報道，同時，僅從V.officinalis葉片中誘導(dǎo)獲得不定根，還未有對北纈草進(jìn)行快速繁殖的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在緩解野生北纈草資源緊缺和過度采挖破壞生態(tài)平衡的問題，提供一種北纈草組織培養(yǎng)繁殖方法。該方法能加快北纈草的繁殖速度，有利于擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)措施來實(shí)現(xiàn)的：一種北纈草(Valeriana?fauriei?Briq.)組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體誘導(dǎo)：取北纈草幼嫩的莖段作為外植體，進(jìn)行無菌處理，接種于啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)至獲得不定芽；

(2)繼代增殖培養(yǎng)：將步驟(1)中形成的不定芽在無菌條件下切下，接種至增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖；

(3)生根培養(yǎng)：將步驟(2)所得不定芽在無菌條件下分離并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行根誘導(dǎo)和壯苗，得到完整的組培苗；

(4)組培苗移栽：將步驟(3)中的健壯的組培苗加入少量無菌水，半開蓋培養(yǎng)5～10天，再全開蓋培養(yǎng)5～10天；將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，栽入由蛭石和營養(yǎng)土按1∶1～1∶3的比例混合成的培養(yǎng)基質(zhì)中煉苗培育成健壯的幼苗；

其中，步驟(1)中啟動培養(yǎng)基為0.2～1.0mg/L?6-BA、0.01～0.02mg/L?IBA和8g/L瓊脂的pH為5.8的MS培養(yǎng)基；

其中，步驟(2)中增殖培養(yǎng)基為0.2～1.0mg/L?6-BA、0.01～0.02mg/L?IBA和8g/L瓊脂的pH為5.8的MS培養(yǎng)基；

其中，步驟(3)中培養(yǎng)基為0.1～0.5mg/L?IBA和8g/L瓊脂的pH為5.8的1/2MS培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，上述方法還包括步驟(1)中外植體除菌處理的方法為：用自來水沖洗15～25min，用60～80％乙醇消毒30～90s，用0.5～1.5％次氯酸鈉溶液消毒10～20min后取出，用無菌水沖洗3～5次，用滅菌后的濾紙吸干表面水分，得到無菌北纈草外植體。

優(yōu)選地，上述方法還包括步驟(1)、步驟(2)與步驟(3)中培養(yǎng)條件：2～5％蔗糖、0.5～2％瓊脂，pH5～6，培養(yǎng)溫度為20～30℃，光照時間12～20h·d^-1，光照2500～4000lux。

更優(yōu)選地，上述方法還包括步驟(1)、步驟(2)與步驟(3)中培養(yǎng)條件：3～4％蔗糖、0.5～1％瓊脂，pH5.5～6，培養(yǎng)溫度為24～26℃，光照時間15～18h·d^-1，光照3000lux。

更優(yōu)選地，一種北纈草的組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟：

(1)外植體誘導(dǎo)：將幼嫩的莖段用自來水沖洗20min，用70％乙醇消毒1min，用1％次氯酸鈉溶液消毒15min后取出，用無菌水沖洗3～5次，接種于培養(yǎng)基上培養(yǎng)，置于光照3000lux，光照時間16h·d^-1，溫度為25±1℃下培養(yǎng)；