[發明專利]一種金葉龜甲冬青組培繁殖方法

有效

• 申請號: 201410478843.2
• 申請日: 2014-09-19
• 公開（公告）號: CN104255491A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 鄭凱;丁久玲;王海珍;李大功;蔡泓宇
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

技術領域

本涉及冬青繁殖領域，尤其涉及一種金葉龜甲冬青組培繁殖方法。

背景技術

金葉龜甲冬青是冬青科冬青屬彩葉植物，具有常綠、耐低溫、植株低矮緊湊等特點。是我國是近幾年從國外引進的彩葉新品種，其老葉片濃綠具光澤，新葉片金黃色，色澤極其亮麗。近年來龜甲冬青在國內外綠化產業中需求旺盛，因此應加快其繁殖速度，滿足其日益增加的市場需求。金葉龜甲冬青的常規繁殖方法有扦插繁殖和嫁接繁殖，扦插繁殖的繁殖周期為1年左右，成活率90%左右，繁殖系數小于等于1；嫁接繁殖的繁殖周期為一年以上，成活率60%-80%左右，繁殖系數小于等于1，由于其繁殖速度較慢，繁殖系數和成活率低限制了它的推廣應用。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種金葉龜甲冬青組培繁殖方法，通過組培繁殖來提高金葉龜甲冬青的繁殖系數、繁殖速度。

為達到上述目的，本發明是通過以下的技術方案來實現的，一種金葉龜甲冬青組培繁殖方法，包括以下步驟：

1）消毒滅菌，選取金葉龜甲冬青的幼嫩莖段為外植體，用水清洗干凈后，用消毒液消毒；

2）初代培養，將消毒滅菌后的金葉龜甲冬青外植體接種在初代培養基上，無菌培養室培養30d，；

3）繼代培養，將初代培養得到的芽苗切成帶腋芽的長0.5cm的莖段，接種在繼代培養基上，無菌培養室培養25d-35d，長成0.8-1.2cm的叢生芽苗；

4）壯苗培養，將繼代培養基上的叢生芽苗切下后接種在壯苗培養基上，無菌培養室培養20d-30d；

5）生根培養，當壯苗培養基上的芽苗長至3～4㎝時，轉移到生根培養基上培養，無菌培養室培養40d-50d；

6）煉苗，將經過生根培養的組培苗連同生根培養基移至溫度23±2℃的溫室內放置3d-5d天；

7）移栽，將幼苗取出，用水將組培苗根部的培養基清洗干凈，種入鋪有栽培基質的苗床，大棚栽培20d-30d。

其中初代培養基：包括MS+玉米素（ZT?）0.5-1.0mg/L＋萘乙酸（NAA）0.1mg/L＋蔗糖25mg/L＋瓊脂7mg/L，且培養基的pH值為5.6～5.8；

繼代培養基：包括MS+玉米素（ZT?）?0.5mg/L＋萘乙酸（NAA）0.2mg/L＋蔗糖25mg/L＋瓊脂7mg/L，且培養基的pH值為5.6～5.8；

壯苗培養基：包括MS+玉米素（ZT?）?0.5mg/L＋萘乙酸（NAA）0.2mg/L＋蔗糖30mg/L＋瓊脂7mg/L，且培養基的pH值為5.6～5.8；

生根培養基：包括1/2MS＋吲哚丁酸（IBA）0.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L+活性炭3g/L＋蔗糖20g/L，且培養基的pH值為5.6～5.8；

栽培基質：包括土壤、蛭石、泥炭，土壤、蛭石、泥炭按體積比2:1:1充分混勻。

所述土壤采用經耕作并栽培過花木、蔬菜的土壤，土壤成分和結構適于金葉龜甲冬青的生長，有利于移栽幼苗的成活。

所述步驟1）中用消毒液消毒，過程為先用體積濃度75%酒精浸泡20s，用無菌水沖洗外植體至少3次，每次沖洗時間不少于5min；再轉入質量濃度0.1%?的升汞溶液（HgCl₂）浸泡8-9min，用無菌水沖洗干凈后，用滅菌紙將外植體表面的水分吸干。

步驟2）中培養條件為：溫度20±2℃、光照強度1000~1500lx、光照時間10~12h/d、培養地點無菌培養室。

所述步驟3）、4）、5）中培養條件為：溫度25±2℃、光照強度1500~2000lx、光照時間12~14h/d、培養地點無菌培養室。

步驟3）中每25d-35d將長出的叢生芽苗切下，繼續繼代培養一次，繼代培養3次后，進行壯苗培養。通過反復切割，繼代培養后增殖倍數可達5倍左右。

步驟7）中移栽后噴施稀釋800-1000倍的甲基托布津或1000倍多菌靈藥液，每隔一周噴施一次，連續3-4次。

步驟7）中移栽初期7d-10d內，全封閉管理并遮陰，保持苗床和空氣的濕度在90%左右，溫度為23±2℃。

有益效果：與現有技術相比，本發明的優點在于：

1）提高金葉龜甲冬青的繁殖系數，繁殖系數可達4-6倍；

?2）加快金葉龜甲冬青的繁殖速度，繁殖周期縮短至200-233d；

?3）提高金葉龜甲冬青的成活率，成活率達到93-95%。

具體實施方式