[發明專利]一種導電緩釋型神經組織工程支架的制備方法

有效

• 申請號: 201410478759.0
• 申請日: 2014-09-18
• 公開（公告）號: CN104225685A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 莫秀梅;張建光;孫彬彬;宋煒
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/50;A61L27/22;A61L27/18;D01D5/00;D04H1/728;D04H1/541
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于神經缺損修復涉及生物材料制備領域，特別涉及一種導電緩釋型神經組織工程支架的制備方法。

背景技術

周圍神經的再生以及功能的恢復一直是困擾臨床的一個難題，每年全世界都有大量的患者需要進行神經修復。到目前為止，最常采用的方法是自體神經移植來治療神經斷裂或者缺損。但是，自體神經可供移植的來源非常有限。此外在顯微外科手術中很難避免神經纖維的錯向對接，從而影響神經功能的恢復。近年來隨著組織工程的逐步發展，利用生物材料構建的神經再生導管，為臨床神經缺損修復帶來了希望。

然而周圍神經再生不僅要恢復其結構，更重要的是恢復其對靶器官的支配功能，為了達到或超過自體神經移植的修復效果，近年來研究者們不斷致力可控制的活性復合神經導管的制備。眾所周知，神經傳導的根本在于神經纖維上膜電位的變化，神經傳導即為電信號的傳導，近幾年來有很多文獻報道電刺激可以促進并引導神經細胞遷移。同時，神經生長因子(nerve?growth?factor,NGF)也可以對運動神經的再生起促進作用，至目前為止，未見有基于同軸靜電紡絲技術制備一種負載神經生長因子(NGF)導電型神經組織工程支架的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種導電緩釋型神經組織工程支架的制備方法，本發明的優點在于巧妙的利用同軸靜電紡絲技術，得到導電緩釋型納米纖維神經導管，其生物相容性好，能夠引導神經細胞沿著取向生長，加速神經軸突的延伸，促進受損神經再生修復；本方法操作簡單，可重復性好，經濟效益。

本發明的一種導電緩釋型神經組織工程支架的制備方法，包括：

(1)將質量比為25-50:75-50的絲素蛋白和乳酸-己內酯共聚物溶于溶劑中，溶解攪拌，得到質量體積百分比為8-10％的溶液，然后加入質量比為1:1的聚苯胺PANi和樟腦磺酸，攪拌混勻，得到皮層靜電紡絲溶液；

(2)將神經生長因子NGF完全溶解在超純水中，得到芯層靜電紡絲溶液；

(3)將皮層靜電紡絲溶液、芯層靜電紡絲溶液分別裝入注射器中，進行同軸靜電紡絲，然后熏蒸處理，真空干燥，即得導電緩釋型神經組織工程支架。

所述步驟(1)中乳酸-己內酯共聚物的分子量為M_n≈30萬，乳酸-己內酯的比例為50:50，聚苯胺PANi的分子量Mn≈1.5萬。

所述步驟(1)中溶劑為六氟異丙醇。

所述步驟(1)中溶解攪拌時間為5-6h，加入聚苯胺PANi和樟腦磺酸，攪拌均勻時間為24-48h，攪拌速率均為200-300r/min。

所述步驟(1)中樟腦磺酸可以使聚苯胺具有導電特性。

所述步驟(1)中皮層靜電紡絲溶液中聚苯胺PANi的質量體積百分比為1.2-1.6％。

所述步驟(2)中超純水配制的神經生子因子(NGF)溶液需現配現用，避免長時間放置影響其活性。

所述步驟(2)中芯層靜電紡絲溶液中神經生長因子NGF的濃度為10μg/ml。

所述步驟(3)中同軸靜電紡絲工藝具體為：皮層靜電紡絲溶液裝入注射器中，在微量推進泵的作用下進入同軸裝置復合毛細噴頭的內外毛細噴絲口之間的環狀空隙處；將芯層靜電紡絲溶液裝入注射器，在微量注射泵的作用動下進入同軸裝置復合毛細噴頭的內毛細噴絲頭，開啟靜電壓發生器，推進泵，以及滾筒接收裝置的電機，進行紡絲。

所述噴絲口為同心軸的復合毛細管，所制備的納米纖維具有“芯-殼”結構。

所述步驟(3)中同軸靜電紡絲工藝參數為：紡絲噴頭為內層為8號外層為16號的同心軸噴絲頭；注射泵的推進速度分別為芯層0.2ml/h和殼層1.0ml/h；在同心軸噴絲頭和滾筒接收裝置之間接入的調節電壓為12-13kV；同心軸噴絲頭和滾筒接收裝置之間的距離為5-6cm；滾筒電機提供給滾筒的轉速為4000r/min。

所述步驟(3)中熏蒸處理為乙醇進行熏蒸處理。

所述乙醇的體積百分數為75％，熏蒸處理時間為24-48h。

所述步驟(3)中真空干燥時間為48-72h。