[發(fā)明專利]一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410475101.4
• 申請(qǐng)日: 2014-09-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104232475B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖仕初;田松;夏照帆;吳海斌;鄭勇軍;王志紅;紀(jì)世召
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12M1/12
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31268
• 代理人: 趙青

1.一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，該裝置包括：

磁力加熱攪拌器和操作面板，所述的操作面板鑲嵌于磁力加熱攪拌器上，二者形成一個(gè)整體；

所述的操作面板上設(shè)有3個(gè)以上孔，其中一個(gè)孔為磁力攪拌及過(guò)濾孔，其內(nèi)放置一個(gè)磁力攪拌子，所述的磁力攪拌子的直徑為0.1～1cm，長(zhǎng)度為0.4～2cm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述的磁力加熱攪拌器，控制溫度為25～40攝氏度，攪拌速度為100～1200rpm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述的操作面板上設(shè)有3～5個(gè)孔，各孔分別為：一個(gè)消化孔；一到三個(gè)漂洗孔；一個(gè)磁力攪拌及過(guò)濾孔，所述的磁力攪拌及過(guò)濾孔內(nèi)裝有可抽取式80目～200目的過(guò)濾網(wǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述的消化孔，呈圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為1～5cm，深度為1～5cm；

所述的漂洗孔，為圓形、正方形或其它任意形狀，直徑為1～5cm，深度為1～5cm；

所述的磁力攪拌及過(guò)濾孔，直徑為0.5～5cm，深度為0.5～5cm，孔內(nèi)裝有可抽取式80目～200目的過(guò)濾網(wǎng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，操作面板為長(zhǎng)方體，長(zhǎng)度為10cm～30cm，寬度為10cm～30cm，高度為5cm～40cm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1—5任一所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，該裝置還包括：

消化酶，為由膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶組成的固態(tài)消化酶，優(yōu)選的所述的膠原酶、中性蛋白酶及胰蛋白酶的重量比為1︰1︰1；

等滲電解質(zhì)溶液，為Ph值7.4的電解質(zhì)溶液生理鹽水、PBS液、D-hank’s液，或Hank’S液；

一次性手術(shù)刀；

一次性手術(shù)用鑷子。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的裝置，其特征在于，該裝置還包括：注射器，為1ml、2.5ml或5ml常規(guī)注射器。

8.一種快速即時(shí)分離人皮膚表皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

A、將消化酶溶解于等滲電解質(zhì)溶液中，配制成質(zhì)量濃度為0.1％～1％的消化液，加入消化孔中，啟動(dòng)微型磁力加熱攪拌器，預(yù)熱5～10分鐘，使溶液溫度為25～40攝氏度；

B、將需要分離的斷層皮片，處理成厚度為0.15～0.6mm，大小為0.5cm²～16cm²；

C、將切取步驟B的斷層皮片置于消化孔中孵育5～45分鐘；

D、漂洗孔中加入等滲電解質(zhì)溶液，將孵育后的斷層皮片進(jìn)行漂洗；

E、將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術(shù)用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術(shù)刀刮除表皮層的真皮面數(shù)次，并刮除真皮層的表皮面數(shù)次，得到少量的含細(xì)胞及部分雜質(zhì)的溶液；

F、在磁力攪拌及過(guò)濾孔中加入等滲電解質(zhì)溶液，將所獲得的含細(xì)胞及部分雜質(zhì)的溶液置于磁力攪拌及過(guò)濾孔中過(guò)濾，然后取出可抽取式80目～200目的過(guò)濾網(wǎng)，即可獲得含分離細(xì)胞的溶液；

G、進(jìn)一步優(yōu)選的方案為，將漂洗后的斷層皮片平放于操作面板上，表皮面朝上，用手術(shù)用鑷子揭起、分離表皮層，用一次性手術(shù)刀刮除表皮層的真皮面數(shù)次，并刮除真皮層的表皮面數(shù)次，得到少量的含細(xì)胞及部分雜質(zhì)的溶液。然后用手術(shù)刀將表皮層適當(dāng)切割成碎片，將所獲得的含細(xì)胞及部分雜質(zhì)的溶液及表皮碎片置于預(yù)先加入等滲電解質(zhì)溶液的磁力攪拌及過(guò)濾孔中，常溫下以100～1200rpm攪拌5～10分鐘，然后取出可抽取式80目～200目的過(guò)濾網(wǎng)，在磁力攪拌及過(guò)濾孔中即可獲得含分離細(xì)胞的溶液。