[發明專利]一種胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基及其應用

在審

• 申請號: 201410473324.7
• 申請日: 2014-09-16
• 公開（公告）號: CN104232735A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 吳聯順;楊光
• 申請（專利權）人: 青島永通電梯工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12R1/145
• 代理公司: 北京紐盟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11456
• 代理人: 許玉順

技術領域

本發明為微生物領域，特別涉及一種胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基及其應用。

背景技術

產氣莢膜梭菌(C.perfringens)是臨床上氣性壞疽病原菌中最多見的一種梭菌，因能分解肌肉和結締組織中的糖，產生大量氣體，導致組織嚴重氣腫，繼而影響血液供應，造成組織大面積壞死，加之本菌在體內能形成莢膜，故名產氣夾膜梭菌。

肉毒桿菌是一種生長在缺氧環境下的細菌，在罐頭食品及密封腌漬食物中具有極強的生存能力，是毒性最強的毒素之一。肉毒桿菌是一種致命病菌，在繁殖過程中分泌毒素，是毒性最強的蛋白質之一。軍隊常常將這種毒素用于生化武器。人們食入和吸收這種毒素后，神經系統將遭到破壞，出現頭暈、呼吸困難和肌肉乏力等癥狀。

培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養和鑒定。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基)，較長時間的貯存，必須放在3～6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管，現在均改制成粉末。

培養基根據化學分類為天然培養基、組合培養基和半組合培養基；根據物理分類為液體培養基、固定培養基和脫水培養基；根據微生物分類為選擇性培養基、鑒別培養基。

發明內容

本發明克服現有技術中的不足，提供一種胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基及其應用。

本發明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養組分的組合進行篩選，對培養基的pH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環境等物化因子進行了比較，研究出了本發明的培養基。

本發明所采用的技術方案為：

一種胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基，所述培養基的組分包括21g/L皰肉培養基、4.0g/L乳糖、15.0g/L胰月示、7.55g/L大豆胨、1.54g/L偏亞硫酸氫鈉、1.5g/L檸檬酸鐵銨，pH值為7.5-7.7。

在以上方案的基礎上，所述皰肉培養基為每升皰肉培養基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5.8g、去氧膽酸鈉0.33g、磷酸二氫鈉2.0g。

本發明還公開了所述的胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基的應用，用于產氣莢膜梭菌的平板計數。

胰月示、大豆胨、蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖和乳糖為可發酵糖類提供碳源；偏亞硫酸氫鈉和檸檬酸鐵銨用于檢測硫化氫的產生，使菌落中心呈黑色；瓊脂是培養基的凝固劑；D-環絲氨酸抑制非梭菌的細菌。

稱取本品47.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝于500ml錐形瓶中各250ml，121℃高壓滅菌15分鐘。傾倒平皿前，每250ml培養基(50℃)中，加入過濾除菌的0.5％D-環絲氨酸溶液20ml。

本發明的有益效果：

1、培養基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；

2、菌生長迅速，變異率低；

3、便于觀察，分析。

具體實施方式

實施例1：

一種胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基，所述培養基的組分包括21g/L皰肉培養基、4.0g/L乳糖、15.0g/L胰月示、7.55g/L大豆胨、1.54g/L偏亞硫酸氫鈉、1.5g/L檸檬酸鐵銨，pH值為7.5-7.7。

所述皰肉培養基為每升皰肉培養基中含有蛋白胨20.0g、牛肉浸粉3.0g、酵母浸粉5.0g、可溶性淀粉1.5g、葡萄糖3g、枸櫞酸鈉5.8g、去氧膽酸鈉0.33g、磷酸二氫鈉2.0g。

胰月示、大豆胨、蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖和乳糖為可發酵糖類提供碳源；偏亞硫酸氫鈉和檸檬酸鐵銨用于檢測硫化氫的產生，使菌落中心呈黑色；瓊脂是培養基的凝固劑；D-環絲氨酸抑制非梭菌的細菌。

稱取本品47.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝于500ml錐形瓶中各250ml，121℃高壓滅菌15分鐘。傾倒平皿前，每250ml培養基(50℃)中，加入過濾除菌的0.5％D-環絲氨酸溶液20ml。

在36±1℃培養20-24小時