[發明專利]同步檢測草莓疫霉和樹莓疫霉的三重PCR引物及其擴增方法和用途

有效

• 申請號: 201410472466.1
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN104195259B
• 公開（公告）日: 2016-11-30
• 發明（設計）人: 姜一;郭京澤;劉鵬;林宇;廖芳;李關榮;崔鐵軍;羅加鳳
• 申請（專利權）人: 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同步檢測檢疫性真菌病害草莓疫霉P.?fragariae和樹莓疫霉P.?fragariae.?rubi的三重PCR引物，實現了同時檢測P.?fragariae和P.?rubi，引物序列如下：

通用引物：

18SUF：CGC?GGT?AAT?TCC?AGC?TCC?AAT?A

18SUR：AGA?ACA?TCT?AAG?GGC?ATC?ACA?GAC?C

草莓疫霉特異引物：

PFSF：TGT?ATA?TTT?AAT?ACG?TAA?TTA?GCT?C

PFSR：AAT?CTA?TAT?TGT?TGT?GAT?AAA?TG

樹莓疫霉特異引物：

PRSF：ACT?CCA?TAA?TAG?ATA?TAT?ACG?TG

PRSR：AAC?CAC?TTA?ATG?GAA?AG

所述通用引物18SUF/18SUR擴增片段為884bp，作為DNA提取和擴增過程的質量控制；特異引物PFSF/PFSR擴增片段為615bp，PRSF/PRSR擴增片段為559bp，這三套特異引物用于草莓疫霉和樹莓疫霉的菌絲基因組DNA特異三重PCR擴增。

2.一種權利要求1所述的同步檢測草莓疫霉和樹莓疫霉的三重PCR引物及其擴增方法，其特征在于，包括下述的擴增體系和擴增程序：

（1）擴增體系

建立30μL的擴增體系為，包括10×Buffer3.0μL（其中含終濃度為1.5mmol/L的MgCl2)；2.5mmol/L?dNTPs?為2.0μL；0.4μL?Taq?DNA聚合酶(5U/μL)；濃度為10μmol/L的引物18SUF/18SUR、PRSF/PRSR和PFSF/PFSR依次為0.1μL/0.1μL、0.8μL/0.8μL、1.5μL/1.5μL；DNA模板1μL（約為20ng)，余量為雙蒸水；

（2）反應程序

設立反應程序：94℃預變性4min；94℃變性30s，54℃復性40s，72℃延伸45s，35個循環；72℃延伸7min。

3.如權利要求1所述同步檢測草莓疫霉和樹莓疫霉的三重PCR引物及在檢測冬草莓疫霉和樹莓疫霉方面的應用。