[發(fā)明專利]六色實時熒光定量PCR分析儀

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410470105.3
• 申請日: 2014-09-16
• 公開（公告）號: CN104267009A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳啟躍;陳劍飛;張洪剛;朱福來;孫宏偉;苑紅麗
• 申請（專利權(quán)）人: 北京金諾美生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種PCR分析儀，更加具體地，涉及一種六色實時熒光定量PCR分析儀。

背景技術(shù)

對于許多研究、醫(yī)療和工業(yè)應(yīng)用來說，核酸擴增反應(yīng)都是至關(guān)重要的。這些反應(yīng)用于臨床和生物學(xué)研究、傳染性疾病的檢測和監(jiān)測、突變的檢測、癌癥標(biāo)志物的檢測、環(huán)境監(jiān)測、遺傳鑒定、生物防御應(yīng)用中的病原體檢測等等。特別地，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)已經(jīng)在所有這些領(lǐng)域中應(yīng)用，包括應(yīng)用于病毒和細(xì)菌檢測、病毒負(fù)荷監(jiān)測、稀有和/或難以培養(yǎng)的病原體的檢測、生物恐怖威脅的快速檢測、癌癥患者中最少量殘留疾病的檢測、食物病原體試驗、血液供給篩選等等。關(guān)于PCR，如此廣泛應(yīng)用的主要原因是由于它的速度和容易使用(典型地使用標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒和相對簡單且低成本的器具在數(shù)小時內(nèi)進(jìn)行)、它的靈敏度(經(jīng)常可以檢測到樣品中幾十個拷貝的靶序列)、以及它的魯棒性(可以容易地分析低質(zhì)量樣品或保存的樣品，例如法醫(yī)樣品或固定的組織樣品)。

而實時熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。借助于熒光信號來檢測PCR產(chǎn)物，一方面提高了靈敏度，另一方面可以在每次PCR循環(huán)收集數(shù)據(jù)，建立實時擴增曲線，準(zhǔn)確地確定域值循環(huán)數(shù)(CT值)，計算起始DNA拷貝數(shù)，做到了真正意義上的DNA定量。圖1為現(xiàn)有技術(shù)US6369893B1中公開的一種光學(xué)測試系統(tǒng)，包含多個熱交換模塊37，它由樣品杯2、熱交換模塊37、風(fēng)扇42、電路板54、計算機等構(gòu)成。其中熱交換模塊37具有一對相對放置熱板34A、34B，在熱板34A、34B中插入樣品杯2并對樣品杯中的混合物進(jìn)行加熱和/或冷卻。模塊37還具有光源激發(fā)部A和光探測器部C，它們對著混合物定位從而可進(jìn)行光學(xué)觀測。樣品杯2具有反應(yīng)腔10，用來保持反應(yīng)混合物，樣品杯2被設(shè)計成能夠最佳地將熱量傳遞到反應(yīng)混合物以及從反應(yīng)混合物傳遞出熱量，并且有效光學(xué)觀察反應(yīng)混合物。樣品杯2做成薄片狀有利于最佳的熱量傳遞，因為提供了很大的用于熱量傳導(dǎo)以及用于接觸熱板的表面。另外，樣品杯2的壁在反應(yīng)腔10處具有光學(xué)窗口，這樣整個反應(yīng)混合物能夠被光學(xué)觀測。

其中的光學(xué)激發(fā)部46中僅包括了四個LED光源100A-100D，顏色分別為綠色、綠色、藍(lán)色及綠色。但是，目前PCR反應(yīng)體系中的熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號很微弱，采用上述光學(xué)組件很難對微弱熒光實現(xiàn)精確檢測。

現(xiàn)有技術(shù)中光源100A-100D，顏色分別為綠色、綠色、藍(lán)色及綠色，在實際使用中會出現(xiàn)如道間干擾等問題，即很難同時找到激發(fā)波長同時滿足這4個光源的PCR試劑。同時四通道的PCR分析儀無法匹配高于四重的PCR試劑。而隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及實際生產(chǎn)生活中對六重PCR的客觀需要，使得目前的四色PCR儀無法滿足上述更高的要求。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中的四通道PCR分析儀的缺點，本申請?zhí)峁┝艘环N六色實時熒光定量PCR分析儀，包括光源激發(fā)部和光探測器部。