[發明專利]一種提高大花蕙蘭類原球莖保存效果的方法

有效

• 申請號: 201410467904.5
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104255707A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 張亞非;王路堯;任麗;陳冠群;申曉輝
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00;A01H4/00
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 梁海蓮

1.一種提高大花蕙蘭類原球莖保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化法超低溫保存的方法對大花蕙蘭類原球莖進行保存，具體步驟如下：

1)預培養：將大花蕙蘭類原球莖置于預培養基上，在光照培養箱中預培養1～5天；

2)裝載液處理：室溫下，將大花蕙蘭類原球莖在裝載液中浸泡處理40～60分鐘后移除裝載液；

3)玻璃化溶液處理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脫水處理大花蕙蘭類原球莖40～60分鐘；

4)液氮保存：保持大花蕙蘭類原球莖在玻璃化溶液中浸泡的狀態，將其置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液為含有0.1～0.5g/L碳納米管的玻璃化冷凍保護液。

2.如權利要求1所述提高大花蕙蘭類原球莖保存效果的方法，其特征在于，所述大花蕙蘭類原球莖預培養基為含有40～80g/L山梨醇的MS固體培養基。

3.如權利要求1所述提高大花蕙蘭類原球莖保存效果的方法，其特征在于，所述裝載液為含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L?KNO₃的MS培養液。

4.如權利要求1所述提高大花蕙蘭類原球莖保存效果的方法，其特征在于，所述玻璃化溶液為含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亞砜、0.4mol/L蔗糖和0.1～0.5g/L碳納米管的MS培養液。

5.一種大花蕙蘭類原球莖的解凍及再培養方法，所述大花蕙蘭類原球莖為采用如權利要求1～4任一權利要求所述方法保存的大花蕙蘭類原球莖，所述大花蕙蘭類原球莖的解凍及再培養方法為將大花蕙蘭類原球莖從液氮中取出，先水浴解凍，然后去除玻璃化溶液后用洗滌液洗滌，最后轉入恢復培養基中恢復培養。

6.如權利要求5所述解凍及再培養方法，其特征在于，水浴解凍的條件為在30～40℃的水浴中解凍60～120s。

7.如權利要求5所述解凍及再培養方法，其特征在于，所述洗滌液為含有1～1.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L?KNO₃的MS培養液洗滌，洗滌工藝為：用洗滌液在室溫下將大花蕙蘭類原球莖浸泡10～30分鐘。

8.如權利要求5所述解凍及再培養方法，其特征在于，所述恢復培養基為含有1～2mg/L?6-芐基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L萘乙酸和30g/L蔗糖的MS固體培養基。