[發明專利]一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法

有效

• 申請號: 201410467449.9
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104215776B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 孫怡雯;鐘俊蘭
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙)44268
• 代理人: 王永文,劉文求

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，尤其涉及一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法。

背景技術

?流感病毒是一種可致哺乳類及禽類急性上呼吸道感染的RNA病毒。目前，對于該病毒及其各種亞型的檢測和防控已成為全世界面臨解決的醫學問題。流感病毒表面抗原主要分為兩種：血凝素蛋白和唾液酸苷酶。其中血凝素蛋白的分布占了病毒表面的80%，因此對血凝素蛋白的檢測可提高流感病毒識別的敏感度。現有技術中對血凝素蛋白的檢測絕大多數采用生化免疫學方法，例如熒光免疫發光、免疫印跡法以及酶聯免疫吸附法等。這些方法在廣泛被利用的同時，也突現出其不便之處：在檢測抗原-抗體反應過程中，需要引入熒光探針或蛋白酶作為標記物，由于探針標記物的存在，一定程度上復雜了樣品制備及檢測過程，增加了檢測時間，降低了檢測效率。

因此，現有技術還有待于改進和發展。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，旨在解決現有的檢測方法檢測時間長、檢測效率低的問題。

本發明的技術方案如下：

一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，包括步驟：

a、將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9，將單克隆抗體F10與抗原溶液H9等體積比反應得到反應物；

b、將反應物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復合物結構成型；

c、將復合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，記錄與濃度有關的太赫茲強度吸收光譜；

d、根據與濃度相關的太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣本中含有血凝素蛋白。

所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟a中，單克隆抗體F10以固定濃度230μg/ml與抗原溶液等體積比反應。

所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟c中，檢測盒中的復合物厚度為0.3cm。

所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟c中，所述太赫茲光束的頻率范圍為0.1~1.5THz。

所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟b中，在室溫條件下孵育30分鐘。

所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟a中，將樣本溶于PBS緩沖液中配制成7.5、15、29、56、113、225以及430μg/ml的濃度梯度。

有益效果：本發明的方法對血凝素蛋白的檢測靈敏度大大提高，優于ELISA等傳統檢測技術，并且無需引入標記物，節省了大量的檢測時間，減少了操作步驟，提高了檢測效率。

附圖說明

圖1為本發明實施例中太赫茲強度吸收光譜圖。

圖2為本發明實施例中太赫茲介電損耗角與抗原-抗體結合位點比關系圖。

圖3為現有技術中采用ELISA方法檢測的濃度關系圖。

圖4為本發明實施例中太赫茲介電損耗角與太赫茲強度吸收光譜的關系圖。

具體實施方式

本發明提供一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法包括步驟：

a、將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9，將單克隆抗體F10與抗原溶液H9等體積比反應得到反應物；

b、將反應物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復合物結構成型；

c、將復合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，記錄與濃度有關的太赫茲強度吸收光譜；

d、根據與濃度有關太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣本中含有血凝素蛋白。

其中的步驟a中，先將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9，以形成濃度梯度，具體是將樣本溶于pH7.4的PBS緩沖液中，配制成7.5、15、29、56、113、225以及430μg/ml的濃度梯度的抗原溶液H9（即血凝素蛋白溶液）。

然后將單克隆抗體F10與抗原溶液H9等體積比反應得到反應物。