[發明專利]基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法

有效

• 申請號: 201410466703.3
• 申請日: 2014-09-13
• 公開（公告）號: CN104215617B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 陳偉;鄧豪華;吳鋼偉;劉銀環;彭花萍
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是利用脲酶特異性催化尿素生成氨和二氧化碳的體系，新生成的氨能提高所述體系的pH值，使N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇的熒光發生猝滅，從而表現出熒光發射光譜特征的變化，能用于脲酶活性的測定。

2.根據權利要求1所述的基于熒光金納米團簇的脲酶抑制劑測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將濃度為0.02~0.18?mol/L?的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液和濃度為0.1~0.8?mol/L的氫氧化鈉溶液加入到濃度為0.01~0.1?g/L的氯金酸溶液中，混勻，置于20~70°C水浴恒溫反應0~3.5小時，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行透析純化處理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸-金納米團簇熒光材料水溶液。

3.根據權利要求2所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將0.6?mL濃度為0.5?mol/L的氫氧化鈉溶液與0.4?mL濃度為0.02?g/L的氯金酸溶液加入到4?mL濃度為0.08?mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混勻，置于37°C恒溫水浴槽中反應2.5?h，反應液由淺黃色變為無色，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行純化處理，純化后的金納米團簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。

4.根據權利要求2或3所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是利用N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇在650?nm處的發射光強度值（F₆₅₀）以判斷脲酶含量，所使用的激發波長為355?nm。

5.根據權利要求4所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是將不同濃度pH=6.0的脲酶溶液加入到0~2.5?mol/L、pH=6.0的尿素溶液中，混合均勻后在25°C的恒溫水浴槽中反應0~50?min，測定發射光強度值F₆₅₀，在脲酶濃度為2.2~44?U/L的范圍內其發射光強度值F₆₅₀與脲酶濃度呈線性關系，檢測限為0.55?U/L。

6.根據權利要求4所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是尿素的濃度優選為1?mol/L，反應時間優選為40?min。

7.根據權利要求4所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是金納米團簇溶液，脲酶溶液和尿素溶液按體積比為4：1：4混合，反應總體積為0.45?mL。

8.一種基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，包括如下步驟：取適量人胃組織，加入2?mL濃度為1?mol/L、pH=6.0的尿素溶液中，混合均勻后在25°C的恒溫水浴槽中反應40?min，取0.25?mL上述反應液，加入0.2?mL?N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇溶液，在25°C的恒溫水浴槽中反應3?min，測定發射光強度值F₆₅₀以定性判斷胃組織是否存在幽門螺旋桿菌。

9.根據權利要求8所述的基于金納米團簇的脲酶活性熒光測定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保護的金納米團簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將0.6?mL濃度為0.5?mol/L的氫氧化鈉溶液與0.4?mL濃度為0.02?g/L的氯金酸溶液加入到4?mL濃度為0.08?mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混勻，置于37°C恒溫水浴槽中反應2.5?h，反應液由淺黃色變為無色，反應結束后用截留分子量為3500的透析袋對反應液進行純化處理，純化后的金納米團簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。