[發明專利]一種鹿皮膠原蛋白的提取方法

有效

• 申請號: 201410465783.0
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104313090B
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 王全凱;李慶杰;王蓮萍;王琦;都帥;胡太超;博士儒;陶珊
• 申請（專利權）人: 王全凱
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種利用高壓脈沖電場技術從鹿皮中提取膠原蛋白的方法。

背景技術

膠原(collagen)是一種由動物細胞合成的生物高分子，廣泛存在于有機體中的結構蛋白質，約占哺乳動物總蛋白的1/3，是皮膚、軟骨、動脈血管壁及結締組織的主要成分，在動物體內起支持、保護、連接等多種作用。膠原蛋白具有良好的生物相容性和弱抗原性，在保健品、藥品輔料以及生物材料等領域應用十分廣泛，常規膠原蛋白提取方法包括酸法、堿法、熱降解法、酶法以及這些方法結合使用等，在提取過程中存在工藝周期長，工藝步驟復雜，提取率較低等問題，Gomez-Guillen等研究了高壓處理對膠原蛋白提取過程的影響，此外，超聲、壓力脈沖等預處理方法也被嘗試用于膠原蛋白提取。孟黃軍等人以膠原蛋白的熱穩定性為基礎，考察了基于多級逆流固液萃取技術的魚鱗膠原蛋白提取工藝，探討了酶促反應和膜分離耦合技術用于制備膠原蛋白多肽的可行性。王建輝等人采用酸法和酶法從東北特產梅花鹿鹿皮中提取膠原蛋白，對其中的水分、灰分、氮含量、微量元素及羥脯氨酸含量、分子量、氨基酸及飽濕性和吸水性進行測定，并與牛皮和豬皮的膠原進行比較。

發明內容

本發明的目的是提供一種從梅花鹿皮或馬鹿皮中提取膠原蛋白方法，采用該方法提取梅花鹿皮或馬鹿皮中膠原蛋白具有提取周期短、提取率高等優點。

本發明的技術方案如下：

①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成1.0cm×1.0cm的小塊，用蒸餾水洗至無血色；②脫脂：膠體磨或高速組織搗碎機搗碎鹿皮，采用超臨界CO2萃取裝置萃取1～5小時，萃取后鹿皮即為脫脂鹿皮；③去除雜蛋白：脫脂鹿皮中加入5倍～20倍(W/V)的1％～5％NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，以溫度20～50℃，場強10～30KV，脈沖數5～10為參數提取，連續收集提取液，離心，棄上清，得到去除雜蛋白的沉淀；沉淀用10倍～30倍(W/V)的蒸餾水沖洗，離心，棄上清，得除鹽后的沉淀：④膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀，按10倍～30倍(W/V)量加入pH1～7的有機酸溶液，加入鹿皮重量1.0％～5.0％(W/W)的蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度20～50℃，場強10～30KV，脈沖數5～10為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液40℃濃縮至-定體積，冷凍干燥，得白色固體的本發明產品，本發明具有的優點在于鹿皮膠原蛋白的提取方法較已有工藝快速、高效、提取率高，適合工業放大生產等優點。

具體實施例：

實施例1

①鹿皮前處理：取新鮮梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗凈，切成1.0cm×1.0cm的小塊，用4℃蒸餾水洗至無血色，瀝干，取1.0kg鹿皮備用；②脫脂：取鹿皮，高速組織搗碎機搗碎，置超臨界CO2萃取釜中25MPa 40℃萃取1小時，取萃取后鹿茸0.85kg備用；③去除雜蛋白：取脫脂鹿皮085kg加入4.25L 5％NaCl溶液混勻，用液體泵將料液連續泵入高電壓脈沖提取裝置中，以溫度50℃，場強30KV，脈沖數10，供料速度，5ml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，棄上清得到去除雜蛋白的沉淀：沉淀用25.5L蒸餾水沖洗，離心，棄水層，得除鹽后的沉淀0.70kg。④膠原蛋白的提取：取上述步驟獲得的沉淀0.70kg，加入pH2的檸檬酸溶液21L，加入14g胃蛋白酶，用液體泵將料液連續泵入高壓電脈沖提取裝置中，以溫度37℃，場強30KV，脈沖數10，供料速度5ml/min為參數提取，連續收集提取液，離心，上清液用旋轉蒸發儀在40℃下濃縮至1.4L，-55℃冷凍干燥，得鹿皮膠原蛋白390g。

實施例2