[發明專利]檢測腫瘤的試劑盒及其專用識別N-乙酰氨基葡萄糖的物質

有效

• 申請號: 201410464565.5
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104267185A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 范振符
• 申請（專利權）人: 范飛舟
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;C12N15/115
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 許靜;黃燦

技術領域

本發明涉及檢測腫瘤的試劑盒及其專用識別N-乙酰氨基葡萄糖的物質。

背景技術

自20世紀80年代，專家利用雜交瘤技術獲得了能識別腫瘤特異性大分子糖蛋白抗原(carbohydrate?antigen,CA)，并研制了單克隆抗體識別系統。發展至今在目前腫瘤體外早期診斷試劑領域，存在競爭性分析和非競爭性夾心分析兩種分析方法。從實驗室檢測的角度，腫瘤標志物分為血清/血漿腫瘤標志物與組織細胞腫瘤標志。血清/血漿腫瘤標志物大致分為三類：1)胚胎抗原。胚胎期表達、正常成人不表達、伴隨腫瘤發生又重新表達的抗原，如AFP、CEA。2)腫瘤相關糖脂及糖蛋白。CA199、CA50、CA242、CA724、CA125、CA153等。3)激素肽、酶、蛋白。這些在正常組織中有表達，但是在腫瘤組織中只是過量表達的抗原。PSA、NSE、TPA等。對這些腫瘤標志物的檢測也發展出很多微量免疫檢測技術，比如：1959年Berson與Yalow創立了放射免疫測定(radioimmunoassay,RIA),1971年瑞典的Engvall建立了酶聯免疫吸附實驗(enzyme-linked?immunosorbent?assay,ELISA)以及近期的化學發光免疫測定(chemluminescence?immunoassay,CLIA)、電化學發光免疫測定(electrochemiluminesence?immunoassay,ECLI)、時間分辨熒光免疫測定(time-resolved?fluoroimmunoassay,TRFIA)。目前對于任何一個腫瘤標志物不管采用那種測定技術，鑒定腫瘤和非腫瘤患者不是100％準確的。比如AFP對原發性肝癌的特異性為70％；CEA對結腸癌特異性為60％、胰腺癌為80％、胃癌為60％、肺癌為75％和乳腺癌為60％；CA125對卵巢癌為82％；CA153對乳腺癌早期為75％；CA724對胃癌為42％，NSE對小細胞肺癌為70％。以上的標志物并不是廣譜的，大都只能診斷一種或幾種腫瘤，并且以CEA為例，其對胰腺癌診斷效果最好，為80％，雖然對結腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌也有效，但最低的特異性僅有60％，換句話說，40％是會漏診的。腫瘤的早期發現與診斷，對于提高患者治愈率、延長患者生命是至關重要的，致力于腫瘤研究的學者在探索和尋找有效的腫瘤標志從未松懈。

腫瘤早期診斷至今仍然是世界性難題，現用的腫瘤標志物只能檢出約70％的腫瘤，且絕大多數已屬晚期。現行腫瘤標志物大都確切結構尚不明確，難于復制。

現行商品試劑盒的模式分為兩類，夾心模式和競爭模式，且在腫瘤標志物領域只有雙結合體的夾心模式。

發明內容

基于上述缺陷，本發明的目的是提供檢測腫瘤的試劑盒，該試劑盒包含可以與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的物質。本發明利用N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的物質制備簡單，檢測特異性和靈敏性高，適于腫瘤發病初期的檢測。

所述檢測腫瘤的試劑盒為以血清為檢測樣本的試劑盒；所述腫瘤為惡性腫瘤。

所述腫瘤為乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、食管癌、口腔癌、結腸癌、膽管癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、膀胱癌、胃癌、腎癌和賁門癌的一種或幾種。

上述能與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的物質為以N-乙酰氨基葡萄糖為抗原決定簇的單克隆抗體、多克隆抗體、與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的適配體或與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的凝集素。

所述與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的適配體為序列表中序列1所示的核酸。

本發明還保護與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合的適配體，為序列表中序列1所示的核酸。

N-乙酰氨基葡萄糖分子式：C₈H₁₅NO₆，分子量：221.21，化學代號-GlcNAc，其結構如圖1A所示它可以與載體蛋白偶聯得到抗原，制備可以檢測腫瘤的特異性結合體，如抗體、核酸適配體、凝集素等，這些特異性結合體可以與N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合。

上述載體蛋白可以為常用的載體蛋白，如卵白蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)與多管式載體血藍蛋白(KLH)，也可以為糖蛋白，如粘蛋白及其他的蛋白中的一種或幾種。