[發(fā)明專利]檢測(cè)口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒的試劑盒及制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410464443.6
• 申請(qǐng)日: 2014-09-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104195268A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張強(qiáng);盧昌;趙志荀;吳國(guó)華;顏新敏;李應(yīng)國(guó);岳華;周曉黎;李健;朱海霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102
• 代理人: 張晉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可用于檢測(cè)口蹄疫A型、O型和Asia?1型病毒的引物，由包括有這一引物的試劑盒及制備方法。

背景技術(shù)

口蹄疫（Foot-and-mouth?disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth?disease?virus,?FMDV）引起的動(dòng)物急性、烈性傳染病，主要危害豬、牛、羊痘偶蹄動(dòng)物，發(fā)病率極高，造成了巨大的政治、經(jīng)濟(jì)損失，因此被世界衛(wèi)生組織（OIE）列為A類傳染病的首位。FMDV可以分為7個(gè)血清型，即A型、O型、C型、Asia?1型、SAT?1型、SAT?2型和SAT?3型，每個(gè)血清又有許多不同的亞型，且各血清型之間沒(méi)有交叉性免疫，同一血清型的各亞型之間僅有部分交叉免疫。

由于快速鑒別診斷結(jié)果有利于特定型疫苗的選擇和控制疫病蔓延，口蹄疫病毒的分型鑒別診斷一直是研究的熱點(diǎn)。由于口蹄疫各血清型之間沒(méi)有交叉保護(hù)，同一血清型的各亞型之間僅有部分交叉免疫，這使得口蹄疫的診斷和控制更加困難。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)曾被用于口蹄疫診斷和病毒分型，直到1970s該方法仍在一些流行病地區(qū)使用，但是該方法的靈敏度比較低。Roeder?和Le?Blanc?Smith通過(guò)使用兔和豚鼠抗純化146S口蹄疫病毒顆粒高滴度抗血清的ELISA方法成功地檢測(cè)了口蹄疫病毒抗原。該方法的靈敏度比補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)高125倍，并且被用作常規(guī)口蹄疫的診斷和病毒分型。但是ELISA方法檢測(cè)含病毒的上皮懸浮液只有約70-80％陽(yáng)性結(jié)果，因此病毒必須在組織培養(yǎng)中進(jìn)行增殖后，再通過(guò)ELISA中進(jìn)行檢測(cè)和血清型分型。基于單抗的ELISA也被開(kāi)發(fā)用于口蹄疫的診斷和病毒分型(Chen,?H,?et?al.,2012;?Morioka?K,?et?al.,2009)。最近，有人研發(fā)了基礎(chǔ)整聯(lián)蛋白ανβ6和血清特異性單克隆抗體的夾心ELISA方法，并將該方法與普通的多克隆抗體夾心ELISA方法進(jìn)行了比較。整合蛋白/單克隆抗體的ELISA可以識(shí)別FMDV的多種抗原和不同的血清型，雖然該方法在同一靈敏度的條件下比常規(guī)的多克隆ELISA具有更高的特異性，但是仍然有一些FMDVs不能被檢測(cè)出來(lái)，(Ferris?NP,?et?al.,2011)。

由于RT-PCR快速，靈敏和可靠性的優(yōu)點(diǎn)，該方法已被廣泛地用于口蹄疫診斷。近年來(lái)各種RT-PCR檢測(cè)方法已用于早期上皮細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)分離和其組織中口蹄疫病毒RNA的檢測(cè)(Meyer?RF,?et?al.,1991)。Rodriguez等首次可通過(guò)RT-PCR對(duì)口蹄疫病毒O型、A型和C型進(jìn)行分型檢測(cè)(Rodríguez?A,?et?al.,1992)。自此以后不同血清型特異性引物RT-PCR方法已被用于口蹄疫病毒7個(gè)血清型份分型檢測(cè)(Callens,?et?al.,1997;?Vangrysperre,?et?al.,1996)。這些檢測(cè)引物位于口蹄疫病毒基因組的不同位置，包括5'非編碼區(qū)、開(kāi)放閱讀框和3'端非編碼區(qū)。為了提高RT-PCR診斷靈敏度，多組引物結(jié)合的多重檢測(cè)也被用于口蹄疫的檢測(cè)(Giridharan?P,?et?al.,2005;?Bao?H,?et?al.,2008)，但是這些RT-PCR方法的靈敏度依然有限，若前期再結(jié)合ELISA方法一起使用必然會(huì)使該過(guò)程更加耗時(shí)費(fèi)力。