[發明專利]一種九里香懸浮細胞的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201410463221.2
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104255478A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 楊存
• 申請（專利權）人: 南京通澤農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種九里香懸浮培養的快繁方法，屬于生物技術領域。

背景技術

九里香，又稱：石辣椒、九秋香、九樹香等，蕓香科，Murraya?exotica?L.，小喬木，九里香喜溫暖，最適宜生長的溫度為20-32℃，不耐寒。常見于離海岸不遠的平地、緩坡、小丘的灌木叢中。喜生于砂質土、向陽地方。九里香產于：云南、貴州、湖南、廣東、廣西、福建、海南、中國臺灣等地，以及亞洲其他一些熱帶及亞熱帶地區。產臺灣、福建、廣東、海南、廣西五省區南部。九里香葉含多種香豆精類化合物，從廣東、云南、海南、臺灣等各地產品中已分離得到：九里香甲素，九里香乙素，九里香丙素，長葉九里香內酯二醇，長葉九里香醛，5，7-二甲氧基-8-（3’-甲基-2'-酮基丁基）香豆精，海南九里香內酯等，行氣活血；散瘀止痛；解毒消腫。主胃脘疼痛；跌撲腫痛；瘡癰；蛇蟲咬傷。主治跌打腫痛，風濕骨痛，胃痛，牙痛，破傷風，流行性乙型腦炎，蟲、蛇咬傷，局部麻醉。用于胃痛，風濕痹痛；外治牙痛，跌撲腫痛，蟲蛇咬傷。種植方法為種子繁殖，壓條繁殖，扦插繁殖。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種九里香懸浮細胞的快速繁殖方法，由該方法所制備的九里香懸浮細胞生長速度快，可以獲得較高的懸浮細胞，建立一個快速生長的懸浮細胞培養體系，維持其可持續開發和利用。

本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的：

取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.1%的升汞處理8min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25℃，相對濕度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4-5μmol/L2,4-D+1-1.5μmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照4500lx，溫度25℃，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周后的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d后測定懸浮細胞的增長率。

采用本發明制備的懸浮細胞增長率高，周期短，產量大，污染小，利于大規模種植。

下面將結合具體實施方式對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.1%的升汞處理8min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25℃，相對濕度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4μmol/L2,4-D+1μmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照4500lx，溫度25℃，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周后的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d后測定懸浮細胞的增長率，增長率提高50%。

實施例2

取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.1%的升汞處理8min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25℃，相對濕度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+5μmol/L2,4-D+1.5μmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照4500lx，溫度25℃，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周后的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d后測定懸浮細胞的增長率，增長率提高45%。

實施例3

取九里香幼嫩的葉片，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.1%的升汞處理8min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干，消毒處理過的九里香幼嫩的葉片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培養基中進行愈傷組織誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25℃，相對濕度75%，誘導出來的愈傷組織放入液體培養基MSB+4μmol/L2,4-D+1.5μmol/L6-BA進行液體懸浮細胞培養，附加蔗糖50g/L，pH5.8，光照4500lx，溫度25℃，接種密度為8%，125ml藥瓶裝25ml培養基，轉速110r/min，懸浮培養兩周后的出來的細胞放入附加了醋酸鈉10mg/L+苯丙酸鈉10mg/L的液體培養基中，30d后測定懸浮細胞的增長率，增長率提高47%。