[發(fā)明專利]一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410463128.1
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104255467A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊存
• 申請（專利權(quán)）人: 南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的增殖、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)及條件的優(yōu)化，其主要步驟如下：

（1）取苦石蓮幼嫩的葉片，在超凈工作臺上對其進(jìn)行消毒處理；

（2）取步驟（1）消毒處理過的葉片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2,4-D1.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L葡萄糖，1000lx，溫度23℃，濕度50%；

（3）取步驟（2）誘導(dǎo)出來的愈傷組織，接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L?+2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巰基乙醇3-5ml/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織增殖，附加7g/L瓊脂，30g/L葡萄糖，2000lx，溫度23℃，濕度50%；

（4）取步驟（3）生長良好，長勢均一的愈傷組織，稱取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.1mg/L+對氨基苯甲酸80-100mg/L+0.35%瓊脂+20g/L葡萄糖培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時間后，取出樣品，用濾紙吸干細(xì)胞表面水分。

2.?按照權(quán)利要求1所述的一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述苦石蓮無菌葉片的獲得為，取苦石蓮幼嫩葉片，在肥皂水中浸泡5min，流水沖洗25min，超凈工作臺上0.1%氯化汞處理10min，無菌水沖洗7遍，吸水紙吸去表面水分。

3.?按照權(quán)利要求1所述的一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（3）增殖培養(yǎng)基中附加了吸附劑巰基乙醇，可以消除生長過程中褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)。

4.?按照權(quán)利要求1所述的一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（4）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中附加了對氨基苯甲酸，對細(xì)胞生長量和次生代謝物質(zhì)的含量均有顯著的影響。

5.?按照權(quán)利要求1所述的一種苦石蓮懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（3）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)采用水平震蕩培養(yǎng)，震蕩速度90r/min，每60ml細(xì)胞懸浮液裝入150ml三角瓶中培養(yǎng)，溫度26℃，光照2000lx。