[發明專利]一種從大葉藻胚誘導體細胞胚的方法

有效

• 申請號: 201410463126.2
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN105454042B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 鄭鳳英;李樂樂;劉雪芹;金艷梅;張偉;陳玉
• 申請（專利權）人: 山東大學（威海）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明所屬植物組織培養研究領域，本發明涉及一種以大葉藻體胚為外植體的細胞胚的誘導方法。

背景技術

大葉藻(Zostera marina L.)是我國北方沿海（山東、河北和遼寧）海草場的優勢種，具有極其重要的生態服務功能和經濟價值：它不僅是許多經濟魚類等海洋經濟生物棲息、繁殖和藏身的良好場所，對這些海洋生物的幼體和卵起到保護作用，它還能形成眾多的腐殖質，為浮游生物、幼小魚蝦等海洋動物提供了優良的天然餌料，如在膠東半島和遼東半島，大葉藻海草場是海參這種名優海產的最佳天然棲息地。

在近二十多年里，我國大葉藻海草場生態系統遭到了嚴重的破壞，面積急劇縮小，因此，近年來大葉藻海草場的修復已成為了我國北方海洋生態系統修復中不可或缺的一項內容，其草場修復中需要大量的種苗，利用植物組織培養技術在室內培養出無菌苗是緩解目前大葉藻修復移栽中種苗短缺的一個有效方法。

體細胞胚（又稱胚狀體）是植物組織培養中無菌苗再生的一個重要的中間環節，它的成功獲得可為無菌苗再生奠定重要的基礎。本發明以大葉藻的胚為外植體，通過組織培養技術誘導其體細胞胚，目前采用該技術方案的相關專利和文獻未見報導。

發明內容

本發明的目的是提供一種大葉藻體細胞胚的誘導方法，以大葉藻的胚為外植體，可有效地獲得體細胞胚，為大葉藻的快速繁殖和無菌組培苗再生提供重要的技術支撐。

本發明所采用的技術方案為：

本發明的一種大葉藻體細胞胚的誘導方法，是以大葉藻的胚為誘導體細胞胚的外植體。

本發明的具體步驟如下：

1、外植體的選取：采集大葉藻的果實或種子，清洗后在超凈工作臺內進行消毒處理，得到無菌果實或種子，剝去果皮或種皮，取出無菌胚；

2、體細胞胚的誘導培養：將無菌胚接種于培養基中，在15-25℃、黑暗或弱光條件下進行培養。每半月轉接一次，60d后可見胚上有白色小突起出現，約75d后可確認為體細胞胚，期間不經歷愈傷組織階段。誘導培養基是鹽度為20-35‰、且添加了有機添加物、碳源、植物激素的MS固體培養基。

本發明中，所采果實為近乎成熟的果實，種子為健康的成熟種子。

本發明中，優選培養基為MS培養基添加水解酪蛋白500mg/L、蔗糖60g/L、PSK 0.001 mg/L、瓊脂5 g/L、海鹽20 g/L。

本發明中，優選培養條件為18-20℃、暗培養。

本發明的優點在于：大葉藻種子可長期保存，因此以其內的胚為外植體時，外植體的獲取時間較長；且果實和種子易于表面消毒，因此表面消毒效果大大提升，獲得無菌胚的比例也大大提高。本發明成功地從大葉藻胚上誘導出體細胞胚，為大葉藻無菌組培苗再生的實現提供了另一條可能途徑，也為海草組織培養的成功奠定了基礎。

具體實施方式

下面以最佳實施例公開了本發明，然其并非用以限制本發明, 凡依據本發明實施例所作的種種等效替換及修改，均屬于本發明的發明精神及由權利要求所界定的專利范圍內。

實施例：一種大葉藻體細胞胚的誘導方法，其實施步驟包括：

1) 外植體的選取：在大葉藻果實幾近成熟時采集其健康佛焰苞花序，剝去佛焰苞花序外的苞葉，僅留里面的花序及其上的果實，清洗后在超凈工作臺內用15%的過氧化氫浸泡消毒20min，再用滅菌海水沖洗3-5次，得到無菌花序，逐個取下花序上的果實，切開果皮，取出無菌胚；

2) 體細胞胚的誘導培養：在無菌條件下將無菌胚接種于誘導培養基，整個培養過程在18-20℃、黑暗條件下進行。每半月轉接一次。誘導培養基為以MS培養基為基礎培養基，添加水解酪蛋白500mg/L、蔗糖60g/L、PSK 0.001 mg/L、瓊脂5 g/L、海鹽20 g/L。培養60d后可見胚上有白色小突起出現，約75d后可確認為體細胞胚，期間不經歷愈傷組織階段。體細胞胚誘導率為15.58%。