[發明專利]一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法在審
| 申請號： | 201410463079.1 | 申請日： | 2014-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN104255465A | 公開（公告）日： | 2015-01-07 |
| 發明（設計）人： | 楊存 | 申請（專利權）人： | 南京通澤農業科技有限公司 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210046 江蘇省南京市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蓑衣 組織 懸浮 細胞 快速 繁殖 方法 | ||
1.?一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的增殖、懸浮細胞的培養等，主要步驟如下：
（1）取水蓑衣的幼嫩葉片，按照常規的消毒方法對其進行消毒處理；
（2）將步驟（1）滅菌處理過的水蓑衣葉片接入培養基配方為改良MS+KT0.5mg/L+2，4-D2.0mg/L+硫代硫酸鈉100mg/L培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，光強1000lx，溫度23℃，濕度70%-80%；
（3）將步驟（2）誘導出來的愈傷組織接入培養基配方為MS+KT0.2mg/L+2，4-D0.2mg/L+葉酸0.5mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.6%的增殖培養基中培養，PH5.8，光強1500lx，溫度23℃，濕度70%-80%；
（4）取步驟（3）增殖后分散性好的愈傷組織放入液體培養基MS+2，4-D0.2-0.3mg/L+KT0.4-0.6mg/L+5-6mg/L苯丙氨酸中進行振蕩培養，附加蔗糖30g/L，每100ml三角瓶接種30ml液體懸浮細胞，PH5.8，光照2000lx，溫度25℃，20天后稱重，檢測次生代謝物含量。
2.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（1）中所述水蓑衣無菌葉片的獲得為：取水蓑衣的葉片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污漬，流水沖洗35min，超凈工作臺上次氯酸鈉處理14min，無菌水沖洗5-7遍。
3.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（2）中所述愈傷組織的誘導，在培養基中附加硫代硫酸鈉100mg/L，既可促進愈傷組織的生長，又可防止愈傷組織的褐化。
4.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（3）中加入了葉酸0.5mg/L進行懸浮細胞培養，有助于懸浮細胞的生長。
5.?按照權利要求1所述的一種水蓑衣愈傷組織和懸浮細胞的快速繁殖方法，其特征在于：步驟（4）加入了5mg/L苯丙氨酸，可以促進細胞的生長，還可以調節次生代謝物質的合成。
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