[發明專利]鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201410462064.3
• 申請日: 2014-09-12
• 公開（公告）號: CN104198563A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 李月云;李法瀛;韓健;姜麗萍;董云會
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/333
• 分類號: G01N27/333;G01N27/49;G01N33/574
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于納米功能材料以及生物傳感技術領域，提供了一種鉛離子負載金磁性多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法及其應用。

背景技術

腫瘤的發病率高，生長和轉移速度快，對人類的健康有極大的危害。腫瘤標記物是腫瘤細胞產生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產物存在于腫瘤細胞內或宿主體液中，其在臨床上對于隨原發腫瘤的發現，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價及腫瘤復發和預后的預測產生極大的影響，引起人們的廣泛關注。

AFP、CEA等常見的腫瘤標志物，對于肝癌的診斷都能起到一定的作用。對于腫瘤標記物的檢測方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶標記免疫分析法、化學免疫發光分析法、時間分辨熒光免疫分析法等，但多數檢測方法繁瑣，操作復雜，費用昂貴，檢出限高，因此，建立一種快速、簡便、靈敏的檢測方法有重要意義。

夾心型電化學免疫傳感器結合了高特異性的免疫分析技術和高靈敏的電化學分析技術，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低、等優點，在臨床檢驗、環境監測、食品安全控制、生物監測等領域都有重要的應用價值。而構建電化學免疫傳感器的關鍵有兩點：其一是采用簡單、快速、有效的方法將抗原抗體等生物分子固定在電極表面；其二是開發傳感器的信號放大技術。

多壁碳納米管具有大的比表面積，電沉積金具有良好的導電性能，以及大的比表面積能夠很好的固載抗體，能夠加速電子傳遞，這些對提高傳感器靈敏度具有重要作用。

發明內容

本發明提供了一種鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器的制備方法及應用，實現了對肝癌腫瘤標志物的超靈敏檢測。

本發明的目的之一是提供一種鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將所制備的鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器，用于檢測腫瘤標志物。

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1.?一種鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將直徑為4mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）以質量濃度為1%的HAuCl₄溶液為底液，在-0.2V電壓下掃描30s，將金電沉積到電極表面，用超純水沖洗，晾干；

（3）繼續將6?μL、8?~?12?μg/mL的腫瘤標志物一抗Ab₁溶液滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續將3?μL、質量分數為0.5~2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；滴加6?μL、0.01pg/mL~?100?ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標志物抗原標準溶液到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（5）將6?μL、2?~4?mg/mL的Pb²⁺@Au@MWCNTs-MNP/Ab₂二抗孵化物溶液滴涂于電極表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一種鉛離子負載金磁性多壁碳納米管傳感器。

2.所述Pb²⁺@Au@MWCNTs-MNP/Ab₂二抗孵化物溶液，制備步驟如下：

（1）磁性多壁碳納米管的制備

將0.4~1.0g的FeCl₃·6H₂O和0.1~0.3?g的多壁碳納米管MWCNTs分散在37.5?mL的乙二醇中，繼續加入1.8?g的乙酸鈉，超聲溶解，將該溶液在室溫下靜置30~50分鐘后，轉移到反應釜中，加熱至150~250℃，維持14~18小時；冷卻至室溫，將合成物用50?mL的超純水清洗5次；獲得的產物在50℃干燥，制得磁性多壁碳納米管MWCNTs-MNP；

（2）磁性多壁碳納米管氨基化

取0.05~0.2g的磁性多壁碳納米管加入到10mL的無水乙醇中，加入0.1mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷。70℃回流1.5小時，磁分離干燥后得到氨基化磁性多壁碳納米管NH₂-MWCNTs-MNP；

（3）Au@?MWCNTs-MNP的制備