[發明專利]重組類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株(JS40/PR8)及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410460909.5
• 申請日: 2014-09-11
• 公開（公告）號: CN104232594B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 楊煥良;陳化蘭;陳艷;喬傳玲
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

1.一種重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株，其特征在于以H1N1亞型豬流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)為表面抗原血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)基因供體，以流感病毒A/PR/8/34(H1N1)為聚合酶PB2亞基，聚合酶PB1亞基，聚合酶PA亞基，核蛋白(NP)，基質蛋白(M)和非結構蛋白(NS)6個內部基因的供體，通過自然重組得到，所得到的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株命名為A型流感病毒A/swine/Jiangsu/40/PR8(H1N1)，保藏在中國典型培養物保藏中心，地址在武漢大學，其保藏號為CCTCC NO：V201419。

2.權利要求1所述的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株在制備預防類禽型H1N1流感病毒所導致疾病的藥物中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其中所述藥物用于預防動物或人的類禽型H1N1流感病毒感染。

4.一種構建權利要求1所述的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株的方法，該方法包括：

(1)用類禽型H1N1流感病毒株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)和雞胚適應疫苗株A/PR/8/34(H1N1)共同接種雞胚尿囊腔或細胞進行自然重組；

(2)用抗所述雞胚適應疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的抗體篩選，除去表面基因來源于所述雞胚適應疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的毒株；

(3)將篩選得到的毒株在雞胚上進行3代有限克隆純化，利用Trizol強裂變劑法，提取病毒RNA，進行反轉錄，然后用設計的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)和類禽型H1N1流感病毒國內分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)病毒的各8對特異性鑒別引物進行RT-PCR擴增，然后，對擴增產物進行核酸凝膠電泳，鑒定得到的重組病毒為HA和NA來自于類禽型H1N1流感病毒國內分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)、6個內部基因PB2、PB1、PA、NP、M及NS來自流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的重組病毒，即得。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的引物包括：

只能擴增出類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)基因的8個特異性片段而不能擴增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的任何片段的類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的8對特異性鑒別引物，引物序列如下：

以及只能擴增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8個特異性片段而不能擴增出類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的任何片段的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8對特異性鑒別引物，引物序列如下所示：