[發明專利]一種脫細胞真皮基質及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201410460693.2
• 申請日: 2014-09-11
• 公開（公告）號: CN104288837A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 楊淑珍
• 申請（專利權）人: 楊淑珍
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.一種脫細胞真皮基質，其中，所述脫細胞真皮基質由真皮乳頭層制備獲得，并且所述脫細胞真皮基質的厚度為100～800μm；

優選地，所述脫細胞真皮基質的規格為0.5cm×0.5cm～2cm×2cm，優選為1cm×1cm；

優選地，所述脫細胞真皮基質來自人皮膚，更優選地，為尸體皮膚。

2.一種根據權利要求1的脫細胞真皮基質的制備方法，所述方法包括以下步驟：

1)取皮，取包括表皮層和真皮層的斷層皮膚；

優選地，所述斷層皮膚從尸體中獲得；

2)將步驟1)獲得的斷層皮膚處理為凍干片，然后去除50-200μm的表皮層，暴露下方乳頭層，切取100-800μm的乳頭層，得到真皮基質；

優選地，在-15到-80℃的溫度下將所述斷層皮膚處理為凍干片，更優選地，溫度為-27℃；

3)使用固定劑固定步驟2)取得的真皮基質，固定時間為1-3小時，固定后使用蒸餾水洗滌；所述固定劑為含有1.5g/100ml戊二醛的0.01M磷酸鈉緩沖液；

優選地，所述固定時間為2小時；

4)使用堿性溶液去除真皮基質中的細胞成分，反應時間為10小時-60小時，得到脫細胞真皮基質；

優選地，反應時間為20-30小時；

優選地，所述堿性溶液為堿金屬氫氧化物、堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽、氫氧化銨、堿金屬醇化物、有機胺或其混合物，更優選地，所述堿性溶液的當量濃度為1.5-2.0N；進一步優選地，所述堿性溶液為當量濃度1.5-2.0N的NaOH或KOH；

5)使用緩沖液或蒸餾水洗滌所述脫細胞真皮基質10-50分鐘，優選地，洗滌時間為30分鐘；優選地，所述緩沖液為0.01M的磷酸鈉水溶液；

6)將步驟5)得到的脫細胞真皮基質在孵育液中孵育10-30小時；所述孵育液為0.5g/ml的門冬氨酸水溶液、0.5g/ml的谷氨酸水溶液或0.1M甘氨酸水溶液，優選地，所述孵育液為0.5g/ml的門冬氨酸水溶液或0.1M甘氨酸水溶液，優選地，所述孵育液的PH值為7.4。

3.一種根據權利要求1的脫細胞真皮基質的制備方法，所述方法包括以下步驟：

1)取皮，取包括表皮層和真皮層的斷層皮膚；

優選地，所述斷層皮膚從捐獻尸體中獲得；

2)使用固定劑固定步驟1)取得的斷層皮膚，固定時間為1-3小時，固定后使用蒸餾水洗滌；所述固定劑為含有1.5g/100ml戊二醛的0.01M的磷酸鈉緩沖液；

優選地，所述固定時間為2小時；

3)使用堿性溶液去除皮膚中的細胞成分，反應時間為10小時-60小時，得到脫細胞的斷層皮膚；

優選地，反應時間為20-30小時；

優選地，所述堿性溶液為堿金屬氫氧化物、堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽、氫氧化銨、堿金屬醇化物、有機胺或其混合物；更優選地，所述堿性溶液的當量濃度為1.5-2.0N；進一步優選地，所述堿性溶液為當量濃度1.5-2.0N的NaOH或KOH；

4)使用緩沖液或蒸餾水洗滌所述脫細胞的斷層皮膚10-50分鐘；

優選地，洗滌時間為30分鐘；優選地，所述緩沖液為0.01M的磷酸鈉水溶液；

5)將步驟4)獲得的脫細胞的斷層皮膚處理為凍干片，然后去除50-200μm的表皮層，暴露下方乳頭層，切取100-800μm的乳頭層，得到脫細胞真皮基質；

優選地，在-15到-80℃的溫度下將所述斷層皮膚處理為凍干片，更優選地，溫度為-27℃；

6)將步驟5)得到的脫細胞真皮基質在孵育液中孵育10-30小時；所述孵育液為0.5g/ml的門冬氨酸、0.5g/ml的谷氨酸或0.1M的甘氨酸溶液，優選地，所述孵育液為0.5g/ml的門冬氨酸或0.1M的甘氨酸溶液，優選地，所述孵育液的PH值為7.4。

4.一種根據權利要求1的脫細胞真皮基質使用前的處理方法，所述方法為在使用前，將所述脫細胞真皮基質浸泡于無菌生理鹽水0.5-4小時，優選地為浸泡1小時，用100％無菌甘油脫水5-20分鐘，優選地脫水時間為10分鐘，再用無菌生理鹽水沖洗1-5次，優選地沖洗3次，即可使用。

5.根據權利要求1所述的脫細胞真皮基質或根據權利要求2-3所述的制備方法制備的脫細胞真皮基質在制備角膜修補材料中的應用。

6.根據權利要求1所述的脫細胞真皮基質或根據權利要求2-3所述的制備方法制備的脫細胞真皮基質在制備用于治療和/或改善角膜變薄的疾病的材料中的應用。