[發(fā)明專利]一種生長培養(yǎng)基及其用途和培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410459791.4
• 申請日: 2014-09-11
• 公開（公告）號: CN104232573B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安沂華;董健伸
• 申請（專利權(quán)）人: 安沂華
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11447
• 代理人: 王浩然,周建秋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的生長培養(yǎng)基、該生長培養(yǎng)基的用途和培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力及多向分化潛能的未分化或低分化的細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞。

間充質(zhì)干細(xì)胞以一種多能干細(xì)胞，是干細(xì)胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。間充質(zhì)干細(xì)胞因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。間充質(zhì)干細(xì)胞由于其來源廣泛，易于分離培養(yǎng)，并且具有較強的分化潛能和可自體移植等優(yōu)點，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多能干細(xì)胞。從人臍帶中分離出的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，其細(xì)胞含量和增殖能力均優(yōu)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并且免疫原性比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞低，此外還具有取材方便，無倫理學(xué)爭議等優(yōu)點，因此在間充質(zhì)干細(xì)胞中具有更高的臨床應(yīng)用價值。

在實際臨床應(yīng)用中，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的足夠數(shù)量是保證干細(xì)胞治療的必要因素。在體外對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進行擴增是增加臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量的必要途徑。但是，目前臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞只能在體外傳代15-20代，并且傳代后3天以上才能達到80％以上的融合度，此外在傳代15代以后還會出現(xiàn)丟失分化潛能的現(xiàn)象。因此，現(xiàn)有的培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法存在擴增能力差的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有的培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法存在擴增能力差的缺陷，提供一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的生長培養(yǎng)基、該生長培養(yǎng)基的用途和培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。

本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加特定的抗體和ATP，能夠大幅度地提高臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的擴增能力，由此得到了本發(fā)明。

一方面，本發(fā)明提供了一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的生長培養(yǎng)基，該生長培養(yǎng)基含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑含有抗人血管內(nèi)皮生長因子的抗體、抗人類表皮生長因子受體1的抗體、抗人類表皮生長因子受體2的抗體和鳥苷-5-三磷酸三鈉鹽。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，該方法包括：將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞接種于如上所述的生長培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

再一方面，本發(fā)明還提供了所述的生長培養(yǎng)基在培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的用途。

通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明能夠大幅度地提升臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體外的擴增能力。例如，本發(fā)明能夠?qū)⒛殠чg充質(zhì)干細(xì)胞的體外傳代數(shù)提高到25-40代，并且傳代后40-60小時內(nèi)能達到80％以上的融合度，此外在傳代20代以后也不會出現(xiàn)丟失分化潛能的現(xiàn)象。

本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細(xì)說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1是測試實施例1中不同的生長培養(yǎng)基中生長的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生長曲線圖。圖1中，1和2表示制備實施例1和2，3-6分別表示制備對比例1-4，橫坐標(biāo)表示生長時間，縱坐標(biāo)表示550nm處測定各孔吸光光度值(D值)。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。

在本發(fā)明中，在未作相反說明的情況下，使用的液體的體積數(shù)值為20℃下的數(shù)值。

本發(fā)明提供了一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的生長培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑含有抗人血管內(nèi)皮生長因子的抗體、抗人類表皮生長因子受體1的抗體、抗人類表皮生長因子受體2的抗體和鳥苷-5-三磷酸三鈉鹽。