[發明專利]檢測口蹄疫病毒和豬瘟病毒的基因芯片以及試劑盒

有效

• 申請號: 201410456560.8
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104232793A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 文心田;李金海;李興玉;黃小波;曹三杰;文翼平;伍銳
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C40B40/06;C12R1/93
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及一種檢測口蹄疫病毒和豬瘟病毒的基因芯片以及檢測方法。

背景技術

口蹄疫(foot-and-mouth?disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性，熱性，高度傳染性疫病，主要特征是在口腔粘膜、蹄部、乳房、皮膚出現水皰，繼而發生潰瘍的一類傳播速度極快的傳染病。該病嚴重危害畜牧業生產，影響國際貿易和國家聲譽，受到了各國政府的普遍關注，被國際獸疫局列為法定通報的動物傳染病，我國將其列為一類重大動物疫病之首。FMD易感動物包括牛、綿羊、山羊、駱駝和豬等70多種家養和野生偶蹄類動物。該病曾在全球范圍廣泛流行，給世界養殖業造成巨大的經濟損失。近年來，我國曾發生過O型、A型、Asia1型3個血清型的FMD疫情：2005年～2007年發生多起Asia1型口蹄疫疫情；2009年武漢、上海和北京發生A型FMD疫情；2009年和2010年在中國臺灣與香港自治區相繼發生O型FMD疫情，在2010年廣東省廣州市的白云區發生O型FMD疫情，至2010年末我國大陸的9個省的18個地方發生O型FMD疫情。此外，在健康牛群中發現有帶毒情況。我國周邊的印度、越南、阿富汗等國家FMD流行情況比較復雜，國外毒株多次傳入我國，對我國FMD的防控造成巨大的威脅。FMD傳染性強，危害巨大，快速、準確的診斷對FMD的防控具有重要意義。

豬瘟(Classical?Swine?Fever，CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，可表現為急性、慢性、非典型或母豬繁殖障礙的病程，被世界動物衛生組織(OIE)列為須申報的動物疫病，我國將其列為一類傳染病。近年來，一些已宣布消滅豬瘟的歐洲國家出現了豬瘟疫情的復發，2005年～2012年期間，共有46個國家和地區發生了豬瘟。總體上，豬瘟在我國得到了有效的控制，但該病在我國很多地方仍然廣泛存在，其流行形式也以非典型CSF為主，此外，由于多種因素的影響，豬瘟疫苗免疫失敗的現象較為普遍。對豬瘟的防控仍然是豬群疫病防控的重點之一。

口蹄疫(FMD)和豬瘟(CSF)可造成巨大的經濟損失，對這2個病的防控是豬群疫病防控的重點和首要任務。對發病畜禽進行及時準確地診斷，大量開展動物疫病主動監測，掌握畜禽疫病的感染情況，是采取科學防控措施的前提和基礎，也是提高動物疫病科學防控水平的必然要求；同時，通過監測，對病原學陽性動物進行凈化，可有效降低野毒污染，促進畜禽健康。目前針對FMDV、CSFV的病原學檢測方法已有很多報道，對每個病單獨檢測，費事、耗力，增加了檢測成本。生產中迫切需要敏感性高、特異性強的高通量聯合檢測技術，以提高檢測效率，有效降低勞動強度，節約檢測成本。

公告號為CN1274849C的專利公開了同時檢測口蹄疫病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因芯片，但是該文件中沒有芯片的特異性和靈敏度試驗，不能說明其可以特異且靈敏地同時檢出口蹄疫病毒和豬瘟病毒。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種特異性強、靈敏度高、可同時檢測口蹄疫病毒和豬瘟病毒的基因芯片和試劑盒。

本發明檢測口蹄疫病毒和豬瘟病毒的基因芯片，它包括固相載體以及固定在固相載體上的探針；所述探針包括SEQ?ID?NO：5～7所示任意一個或者任意多個基因片段以及SEQ?ID?NO：8～11所示任意一個或者任意多個基因片段。

基因芯片，是指指通過不同方法將生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic?DNA、多肽、抗體、抗原等)固著于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝膠、尼龍膜等固相遞質上形成的生物分子點陣，其突出的特點是微型化、集成化、平行化和高通量。

其中，所述基因芯片還包括陽性對照探針是SEQ?ID?NO：13所示的基因片段，陰性對照探針是SEQ?ID?NO：12所示的基因片段，定位探針是標記了熒光染料的SEQ?ID?NO：15所示的基因片段。

所述熒光染料是cy3熒光染料或cy5應該染料。

所述固相載體為醛基化玻片。

所述口蹄疫病毒是A型、O型或Asia1型口蹄疫病毒。

所述豬瘟病毒是野毒株或疫苗弱毒C株豬瘟病毒。

本發明檢測口蹄疫病毒和豬瘟病毒的試劑盒，它包括前述的基因芯片與擴增口蹄疫病毒和豬瘟病毒基因的試劑；其中，擴增試劑包括SEQ?ID?NO：1～2和SEQ?ID?NO：3～4所示引物對。

所述引物對中，SEQ?ID?NO：1、3所示上游引物與SEQ?ID?NO：2、4所示下游引物的摩爾比為1:10。