[發(fā)明專利]一種應(yīng)用于小分子定性定量分析檢測和高通量篩選血液樣品試劑盒及其制備

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410455561.0
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104215683A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 成曉亮;鄭可嘉
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢品生科技有限公司
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N1/28
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 胡玲

技術(shù)領(lǐng)域

本技術(shù)屬于分析化學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及表面激光解析質(zhì)譜領(lǐng)域。

背景技術(shù)

表面激光解析質(zhì)譜是近年來發(fā)展起來的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，其中以基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)為最重要的實例，此項發(fā)明獲得過諾貝爾化學(xué)獎。主要由兩部分組成：基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時間質(zhì)量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給生物分子，在電離過程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，而使生物分子電離的過程。因此它是一種軟電離技術(shù)，適用于混合物及生物大分子的測定。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質(zhì)荷比(M/Z)與離子的飛行時間成正比，檢測離子。MALDI-TOF-MS具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點，為生命科學(xué)等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測試手段。

然而，以基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜為首的所有基于表面激光解析的質(zhì)譜都需要將樣品制備在特制靶板上面，其操作是將樣品分散在基質(zhì)分子中并形成晶體。當(dāng)用激光照射晶體時，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場作用下飛過真空的飛行管，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時間不同而被檢測，即通過離子的質(zhì)量電荷之比(M/Z)與離子的飛行時間成正比來分析離子，并測得樣品分子的分子量。焦點問題就在于通用的基質(zhì)分子的分子量在1000-3000da,造成了過量的背景質(zhì)譜峰。這就決定了所有此類基于表面激光解析的質(zhì)譜分析只能適用于大分子檢測，比如蛋白質(zhì)，長鏈多肽，核酸，高分子材料等等，而不能應(yīng)用于小分子檢測(分子量小于1000da)，或者說基于表面激光解析的質(zhì)譜分析的高靈敏度/高通量等獨特的優(yōu)勢無法施展在小分子分析檢測上面.而分子量小于1000da的小分子卻是對人類最重要的最具應(yīng)用價值的一類化學(xué)產(chǎn)品，例如95％以上的藥物小分子，所有的氨基酸，維生素等等和人類生活健康相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)。

目前現(xiàn)有技術(shù)針對小分子檢測和篩選還停留在光譜法檢測，例如熒光發(fā)光檢測或者衍生出可以熒光檢測的底物，但此類檢測要求目標(biāo)小分子分子結(jié)構(gòu)具有光活性集團(tuán)，另一弊端就是往往光度法靈敏度較低，檢測不到微量的小分子濃度。液相質(zhì)譜(LC-MS)及氣相質(zhì)譜(GC-MS)的已經(jīng)開始應(yīng)用在小分子的檢測和高通量篩選。但需要消耗大量的人力和溶劑耗材，而且一個樣品從制備到質(zhì)譜分析再到出結(jié)果需要相當(dāng)長一個過程，根據(jù)要求不同，分析一個樣品從樣品制備到拿到結(jié)果需要30-60分鐘，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代生物醫(yī)藥發(fā)展的高通量篩選要求。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：找到一種制備方法簡單、成本較低的樣品制備方法，節(jié)省開支與時間。

技術(shù)方案：一種應(yīng)用于小分子定性定量分析檢測和高通量篩選血液樣品試劑盒，由同等體積的樣品與基本裂解液QL3組成，QL3物質(zhì)組成及體積比為：80-100％乙氰，1-7％甲酸。

一種應(yīng)用于小分子定性定量分析檢測和高通量篩選血液樣品試劑盒的制備，將血液樣本放置室溫，充分解凍；加入-20度同等體積的混合溶液-基本裂解液；收集上清液；加入基本裂解液QL3經(jīng)沉淀蛋白，離心后收集上清液；QL3物質(zhì)組成及體積比為：80-100％乙氰，1-7％甲酸。

優(yōu)選方案為：QL3物質(zhì)組成及體積比為：100％乙氰、5％甲酸。

有益效果：1、制備方法簡單；2、成本較低。

附圖說明

圖1檢測到異搏定(維拉帕米片)Verapamil的質(zhì)譜圖；

具體實施方式

血液樣品制備試劑盒基本裂解液QL3及樣品制備方法

將血液樣本(單個離心管，96孔多孔板，384孔多孔板)放置室溫10分鐘，充分解凍。加入-20度同等體積的混合溶液-基本裂解液QL3(QL2物質(zhì)組成及體積比為：80-100％乙氰，1-7％甲酸)，作用5分鐘，并在50度水浴中作用5分鐘。3000rmp離心10分鐘后，收集上清液。

如圖1所示為在血樣中檢測到異搏定(維拉帕米片)Verapamil的質(zhì)譜圖，我們同時使用MALDI和ESI質(zhì)譜，并不能檢測到該分子。我們的靈敏度已經(jīng)達(dá)到納摩爾級別。同時通量可達(dá)到每日9000個樣品的分析處理能力。