[發明專利]一種養殖所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價的方法

無效

• 申請號: 201410455308.5
• 申請日: 2014-09-10
• 公開（公告）號: CN104198658A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 喻正軍;徐行;曹維維;陳基萍;劉琥;汪雪;方奎;黃剛;陳飛飛;劉志偉
• 申請（專利權）人: 廣西揚翔農牧有限責任公司
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種養殖所用獸藥或消毒劑的檢測方法，尤其是一種養殖所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價的方法。

背景技術

目前，采購市場獸藥及消毒藥前，可以通過微量藥敏評價出高效或對于本養殖場有效藥物，同時對疫情防治也能提供有效獸藥。

發明內容

本發明的目的是提供一種養殖所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價的方法。

這種養殖所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價的方法：

①上樣菌液制備：

將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37℃烘箱靜置孵育2h，此時菌液混濁，取100μL菌液10倍稀釋8-10個梯度，均勻涂于TSA中37℃靜置24h后計數，然后根據計數的菌液濃度調至105CFU/mL，用于上樣菌液；

②不同濃度消毒劑制備：

根據消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度，分為6個梯度；

③上樣孵育：

(1)將96微孔板中第1排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100μL，第7孔加入上樣菌液200μL作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200μL；

(2)第1排前6孔再加入100μL上樣菌液，致使每孔最終體系為200μL；

(3)第2排作為第1排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋；然后置于37℃，靜置孵育，分別于3-6h和12-24h各取4個點觀察MIC及測定OD450值；

④結果判定：

(1)MIC最小抑菌濃度比較：消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度或最低使用濃度比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低，但必須先小于推薦濃度，消毒劑效果越好；

(2)OD450抑菌趨勢比較：對于MIC值相同消毒劑，可以通過OD450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩定性，判定優劣；

(3)有效抑菌濃度費用比較：根據有效抑菌濃度(MIC)，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用；

最后，結合MIC和OD450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優消毒劑。

發明的有益效果：

該發明采用微量藥敏試驗對于養殖場防治疾病所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價，為正確使用藥物提供一定參考依據。

具體實施方式

實施例：

1、上樣菌液制備

將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37℃烘箱靜置孵育2h(此時菌液混濁)，取100μL菌液10倍稀釋8-10個梯度，均勻涂于TSA中37℃靜置24h后計數，然后根據計數的菌液濃度調至105CFU/mL，用于上樣菌液。

2、不同濃度消毒劑制備

根據消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度(一般6個梯度)。

3、上樣孵育

(1)將96微孔板中第1排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100μL，第7孔加入上樣菌液200μL作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200μL。

(2)第1排前6孔再加入100μL上樣菌液，致使每孔最終體系為200μL。

(3)第2排作為第1排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋。然后置于37℃，靜置孵育，分別于3-6h和12-24h各取4個點觀察MIC及測定OD450值。

4、結果判定：

(1)MIC(最小抑菌濃度)比較：消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度(或最低使用濃度)比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低(但必須先小于推薦濃度)，消毒劑效果越好。

(2)OD450抑菌趨勢比較：對于MIC值相同消毒劑，可以通過OD450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩定性，判定優劣。

(3)有效抑菌濃度費用比較：根據有效抑菌濃度(MIC)，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用。

最后，結合MIC和OD450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優消毒劑。