[發(fā)明專利]基于ABCC1基因的小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410455061.7
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104195253A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張友軍;郭兆將;康師;朱勛;吳青君;王少麗;徐寶云;謝文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京知本村知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種用于檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR引物對，其特征在于：

所述引物對的序列為：正向引物如SEQ?ID?NO.2所示，反向引物如?SEQ?ID?NO.3所示。

2.一種用于檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑盒包含權(quán)利要求1所述的引物對。

3.一種檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR檢測方法，其特征在于：

其采用如權(quán)利要求1所述的引物對或權(quán)利要求2所述的試劑盒進(jìn)行PCR。

4.如權(quán)利要求3所述的檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR檢測方法，具體包括以下步驟：

(1)提取待測小菜蛾的RNA樣品，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA模板；

(2)將所述cDNA模板加入到含有所述引物對的PCR反應(yīng)液中得到PCR反應(yīng)體系；

(3)進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR檢測。

5.如權(quán)利要求4所述的檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR檢測方法，其中，所述實(shí)時熒光定量PCR檢測的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性15?min，94℃變性15?sec，55℃退火30?sec，72℃延伸32?sec，40個循環(huán)。

6.如權(quán)利要求4所述的檢測小菜蛾對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac抗性的PCR檢測方法，其中，PCR過程完成后，按0.l℃·s^-1的升溫速率從72℃升至95℃進(jìn)行融解曲線的分析驗(yàn)證，具體過程為：95℃進(jìn)行15?s，然后60℃進(jìn)行1?min，接著95℃進(jìn)行30?s，最后再在60℃進(jìn)行15?s；

若所述待測小菜蛾的樣品產(chǎn)生典型的“S”型擴(kuò)增曲線及單峰融解曲線，且△Ct值[Ct值_{(目的基因ABCC1}-_{內(nèi)參基因L32)}]≤9，則說明所述小菜蛾待測的樣品對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac產(chǎn)生抗性；若△Ct值[Ct值_{(目的基因ABCC1}-_{內(nèi)參基因L32)}]≥10，則說明待測小菜蛾的樣品未對Bt殺蟲蛋白Cry1Ac產(chǎn)生抗性。

7.根據(jù)權(quán)利要求4至6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：所述待測小菜蛾的RNA樣品為小菜蛾4齡幼蟲中腸的RNA樣品。