[發明專利]一種應用于膽堿及脂類分子定性定量分析檢測和高通量篩選增強試劑盒及其制備

有效

• 申請號: 201410454846.2
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104297331A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 成曉亮;鄭可嘉
• 申請（專利權）人: 武漢品生科技有限公司
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡玲

技術領域

本技術屬于分析化學應用領域，具體涉及表面激光解析質譜領域。

背景技術

表面激光解析質譜是近年來發展起來的一種新型的軟電離生物質譜，其中以基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)為最重要的實例，此項發明獲得過諾貝爾化學獎。主要由兩部分組成：基質輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時間質量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子，在電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子，而使生物分子電離的過程。因此它是一種軟電離技術，適用于混合物及生物大分子的測定。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比(M/Z)與離子的飛行時間成正比，檢測離子。MALDI-TOF-MS具有靈敏度高、準確度高及分辨率高等特點，為生命科學等領域提供了一種強有力的分析測試手段。

然而，以基質輔助激光解析電離飛行時間質譜為首的所有基于表面激光解析的質譜都需要將樣品制備在特制靶板上面，其操作是將樣品分散在基質分子中并形成晶體。當用激光照射晶體時，基質從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質-樣品之間發生電荷轉移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場作用下飛過真空的飛行管，根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測，即通過離子的質量電荷之比(M/Z)與離子的飛行時間成正比來分析離子，并測得樣品分子的分子量。焦點問題就在于通用的基質分子的分子量在1000-3000da,造成了過量的背景質譜峰。這就決定了所有此類基于表面激光解析的質譜分析只能適用于大分子檢測，比如蛋白質，長鏈多肽，核酸，高分子材料等等，而不能應用于小分子檢測(分子量小于1000da)，或者說基于表面激光解析的質譜分析的高靈敏度/高通量等獨特的優勢無法施展在小分子分析檢測上面.而分子量小于1000da的小分子卻是對人類最重要的最具應用價值的一類化學產品，例如95％以上的藥物小分子，所有的氨基酸，維生素等等和人類生活健康相關的化學物質。

目前現有技術針對小分子檢測和篩選還停留在光譜法檢測，例如熒光發光檢測或者衍生出可以熒光檢測的底物，但此類檢測要求目標小分子分子結構具有光活性集團，另一弊端就是往往光度法靈敏度較低，檢測不到微量的小分子濃度。液相質譜(LC-MS)及氣相質譜(GC-MS)的已經開始應用在小分子的檢測和高通量篩選。但需要消耗大量的人力和溶劑耗材，而且一個樣品從制備到質譜分析再到出結果需要相當長一個過程，根據要求不同，分析一個樣品從樣品制備到拿到結果需要30-60分鐘，遠遠不能滿足現代生物醫藥發展的高通量篩選要求。

發明內容

發明目的：找到一種制備方法簡單、成本較低的增強電離緩沖液制備方法，節省開支與時間。

技術方案：一種應用于膽堿及脂類分子定性定量分析檢測和高通量篩選試劑盒，由用QLPC已裂解樣本和同等體積的制備試劑QLB1組成，QLPC物質組成及體積比為：50-90％甲醇，10-50％乙氰，10-50毫摩爾的氨水；QLB1物質組成及體積比為：50-70％甲醇，30-50％離子水，1-7％三氟乙酸。

一種應用于膽堿及脂類分子定性定量分析檢測和高通量篩選試劑盒的制備，具體步驟如下：將樣本放置室溫，充分解凍,加入-20度同等體積的試劑QLPC，在50度水浴中反應5分鐘；離心后，收集上清液；取上清后，加入同等體積的制備試劑QLB1；充分混合后，取溶液點在靶板上，靜置后進樣進樣檢測；QLPC物質組成及體積比為：50-90％甲醇，10-50％乙氰，10-50毫摩爾的氨水；QLB1物質組成及體積比為：50-70％甲醇，30-50％離子水，1-7％三氟乙酸。

優選方案為：QLF物質組成及體積比為：90％甲醇，20毫摩爾的氨水；QLB1物質組成及體積比為：50％甲醇，50％離子水，3％三氟乙酸。

有益效果：1、制備方法簡單；2、成本較低。

附圖說明

圖1利用本發明檢測到的膽堿及脂類分子質譜圖

圖2同時檢測多種不同類別和分子結構的小分子質譜圖。

具體實施方式

和脂肪酸相似，膽堿及脂類分子同樣含有長鏈的烷烴碳鏈，這一特殊的結構決定了其疏水性和在堿緩沖液的強烈反應性。疏水性促進了和靶板的非化學性結合，更易被解離。