[發(fā)明專利]一種總膽汁酸的測定試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410454839.2
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104155438A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃俊潮;李希文
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北科技學(xué)院
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種體外診斷試劑，特別是一種總膽汁酸的測定試劑。?

背景技術(shù)

血清總膽汁酸可同時反映肝臟細(xì)胞分泌、合成、損傷三個方面狀態(tài)，?實(shí)驗(yàn)表明總膽汁酸對肝硬化、肝癌的檢測陽性率高達(dá)95%，總膽汁酸檢測的普及使得各類急慢性肝炎、肝硬化，乃至肝癌病人的早期診斷有了較為有效的依據(jù)，臨床診斷意義非常大。?

早在上世紀(jì)70年代，挪威科明公司采用3α-羥基類固醇脫氫酶（3α-HSD）成功的生產(chǎn)出第一代酶法膽汁酸試劑，使膽汁酸的測定真正的進(jìn)入了臨床領(lǐng)域。隨后總膽汁酸測定的方法發(fā)展較快，目前臨床上應(yīng)用的是第五代酶法測定試劑。其反應(yīng)原理如下：膽汁酸會被3α-羥甾醇脫氫酶（亦為類固醇脫氫酶，3α-HSD）以及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（簡稱硫代輔酶：Thio-NAD）特異性地氧化，生成3-酮類固醇以及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NADH）。此外生成的3-酮類固醇在3α-羥甾醇脫氫酶（3α-HSD）及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（NADH）存在下，生成膽汁酸及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD）。如上所述，依據(jù)循環(huán)酶而放大微量的膽汁酸量，測定單位時間內(nèi)生成的β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NADH）在405nm?處的吸光度變化，以求得膽汁酸的濃度。?

目前使用的絕大部分總膽汁酸試劑的穩(wěn)定性都較差，產(chǎn)品在冷藏條件下的有效期絕大多數(shù)都在10個月以下，37度熱穩(wěn)定性在5天以下，試劑開瓶穩(wěn)定在兩周之內(nèi)（測定值不斷下降）；并且多數(shù)品牌總膽汁酸試劑膽紅素負(fù)干擾明顯，且試劑的回收率低，多數(shù)試劑回收率在80%左右，有的甚至低達(dá)60%，以致臨床樣本經(jīng)常出現(xiàn)負(fù)值。因此，目前多數(shù)廠家試劑在應(yīng)用上存在很多的局限性。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種穩(wěn)定性好，抗干擾能力強(qiáng)，回收率高的總膽汁酸測定試劑。?

一種總膽汁酸的測定試劑，該試劑由試劑1和試劑?2組成，其特征在于，試劑1由磷酸鹽緩沖液?、Thio-NAD?、EMULGEN?B-66?、?CTAB?、NaCl?2-羥基吡啶-N-氧化物組成；試劑2由甘氨酸鹽緩沖液、硫酸葡聚糖?、EGTA?、3α-HSD、EMULGEN?B-66、?NADH2-羥基吡啶-N-氧化物組成。?

其中該試劑的組份濃度為：?

試劑1：

???????????????????磷酸鹽緩沖液?????????????????????????2-6g/L

???????????????????Thio-NAD????????????????????????????1.3-1.7?g?/L

???????????????????EMULGEN?B-66????0.3-2ml/L

???????????????????CTAB????????????????????????????????0.1-1.5g/L

???????????????????NaCl?????????????????????????????????3-25g/L

???????????????????2-羥基吡啶-N-氧化物???????????????????0.1-1.2g/L?

試劑2：

???????????????????甘氨酸鹽緩沖液????????????????????????10-20g/L

???????????????????硫酸葡聚糖????????????????????????????1.2-7g/L

???????????????????EGTA?????????????????????????????????1-5g/L

???????????????????3α-HSD??????????????????????????????10KU/L

???????????????????EMULGEN?B-66???????????????????????1-3ml/L

???????????????????NADH?????????????????????????????????3g/L

???????????????????2-羥基吡啶-N-氧化物???????????????????0.1-1.2g/L。