[發(fā)明專利]用于檢測豬流行性腹瀉病毒中和抗體的抗原及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410453990.4 | 申請日： | 2014-09-05 |
| 公開（公告）號： | CN104292311B | 公開（公告）日： | 2017-05-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 曹永長;郝健偉;薛春宜 | 申請（專利權(quán)）人： | 中山大學(xué) |
| 主分類號： | C07K14/165 | 分類號： | C07K14/165;C12N15/50;G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 廣州番禺容大專利代理事務(wù)所(普通合伙)44326 | 代理人： | 劉新年,劉雪花 |
| 地址： | 510275 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 流行性 腹瀉 病毒 中和 抗體 抗原 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種用于檢測豬流行性腹瀉病毒中和抗體的抗原，其特征在于：編碼所述抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.權(quán)利要求1所述的抗原的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
①將PEDV毒株主要抗原基因S依據(jù)冠狀病毒抗原區(qū)域及接頭覆蓋原則分段，其3’端為載體His標(biāo)簽，重組基因片段均通過特異引物從PEDV毒株基因組中擴增而來；擴增的目的基因序列為SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:7；
②將擴增得到的基因及所帶標(biāo)簽基因克隆至載體質(zhì)粒內(nèi)，獲得相應(yīng)的重組質(zhì)粒；大量繁殖重組質(zhì)粒后，將其轉(zhuǎn)化至原核表達(dá)系統(tǒng)的宿主菌株或真核表達(dá)系統(tǒng)的宿主細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白；
③利用Ni離子層析柱純化目的蛋白，通過SDS-PAGE及Western-blot確定目的蛋白的表達(dá)及純化，獲得純化的多肽抗原。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗原的制備方法，其特征在于：當(dāng)步驟②中使用的表達(dá)系統(tǒng)為原核表達(dá)系統(tǒng)時，具體步驟為：將擴增得到的基因片段插入原核表達(dá)載體pET32a相應(yīng)酶切位點處，經(jīng)PCR篩選及測序，篩選出陽性重組子；用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，通過LA瓊脂板及PCR鑒定含重組質(zhì)粒的工程菌；將重組菌接種至LA培養(yǎng)基之后待菌液OD至0.6～0.8時，以異丙基硫代半乳糖苷作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。
4.權(quán)利要求1所述的抗原在制備檢測豬流行性腹瀉病毒中和抗體試劑中的應(yīng)用。
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