[發(fā)明專利]一種急性單核細(xì)胞白血病相關(guān)抗原MLAA?34表位多肽及其疫苗和制藥應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410452959.9
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN104262459B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白菊;何愛麗;張王剛;王劍利;楊云;賀軍濤
• 申請（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K7/08;A61K38/10;A61P35/02;A61K38/08
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司61200
• 代理人: 徐文權(quán)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種急性單核細(xì)胞白血病相關(guān)抗原MLAA-34表位多肽及其疫苗和制藥應(yīng)用。?

背景技術(shù)

急性髓系白血病(acute?myeloid?leukemia，AML)預(yù)后較差，特別是伴有不良染色體或分子異常者，主要是由于化療誘導(dǎo)緩解后復(fù)發(fā)率較高。緩解后根除微小殘留病變(microresidual?disease，MRD)的治療仍具有巨大挑戰(zhàn)。異基因造血干細(xì)胞移植(hematopoietic?stem?cell?transplantation，HSCT)顯示有效的抗白血病作用，但因其配型困難、費(fèi)用昂貴，更重要的是本身存在一些危及生命的并發(fā)癥，如移植物抗宿主病(graft?versus?host?disease，GVHD)，僅適于少部分年輕合適的患者。因此，亟需發(fā)展基于不同抗白血病機(jī)制的新的治療方法。免疫系統(tǒng)擁有特異性殺傷表達(dá)特殊抗原細(xì)胞的精巧能力，這種特異性是免疫治療能夠清除腫瘤細(xì)胞而不傷害正常細(xì)胞的核心。免疫學(xué)新近進(jìn)展和有價(jià)值的白血病相關(guān)抗原的鑒定使得抗原特異性免疫治療能夠根除化療后白血病MRD，有望改善AML患者的總生存。?

急性單核細(xì)胞白血病(acute?monocytic?leukemia，M5)是AML中較常見的類型，在我國AML中，M5發(fā)病率僅次于M2，占AML的23.2％-26.9％，明顯高于西方國家Beutler?E等報(bào)導(dǎo)的8％。大多數(shù)M5患者臨床表現(xiàn)為白細(xì)胞過多癥、易發(fā)生髓外浸潤(包括肝、脾、淋巴結(jié)、齒齦、皮膚、眼睛、喉、肺、膀胱、腦脊膜、中樞神經(jīng)系統(tǒng))、不良染色體核型比例高、完全緩解(complete?remission，CR)率低、易復(fù)發(fā)、預(yù)后不佳。M5的異質(zhì)性和復(fù)雜性決定其尚缺乏分子診斷和靶向治療的特異性腫瘤相關(guān)標(biāo)志物。?

急性單核細(xì)胞白血病相關(guān)抗原-34(monocytic?leukemia?associated?antigen-34，MLAA-34)是發(fā)明人的研究課題組利用“重組cDNA表達(dá)文庫血清學(xué)分析法(serological?identification?of?antigens?by?recombinant?expression?cloning，SEREX)”對人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株篩選的具有代表性的新抗原。后利用5’和3’-cDNA末端快速擴(kuò)增(rapid?amplication?of?cDNA?ends，RACE)技術(shù)擴(kuò)增獲得MLAA-34的全長cDNA序列，序列編號(hào)為：AY288977.2。用NCBI網(wǎng)站(www.ncbi.nlm.nih.gov)的開放讀碼框Finder軟件分析，發(fā)現(xiàn)MLAA-34基因可能定位于人染色體13q14.2；是功能未知的鈣結(jié)合蛋白樣39(calcium?binging?protein?39-like，CAB39L)基因的一個(gè)新的轉(zhuǎn)錄剪接變體。應(yīng)用RNAi技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)MLAA-34基因是和急性單核細(xì)胞白血病發(fā)生相關(guān)的新的抗凋亡分子，慢病毒介導(dǎo)的過表達(dá)MLAA-34的U937細(xì)胞可顯著抑制細(xì)胞凋亡，并增加潛在的致瘤性。免疫共沉淀，鳥槍法測序和生物信息學(xué)分析示71種蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞凋亡或增殖的生物過程和信號(hào)通路。到目前為止，我們已應(yīng)用SYBR?GreenⅠ熒光染料法的實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reverse?transcription?polymerase?chain?reaction，RT-PCR)及Western?blot技術(shù)對M5、非M5白血病骨髓原始細(xì)胞及正常健康的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral?blood?mononuclear?cells，PBMCs)中表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)：MLAA-34基因的mRNA及蛋白水平在AML-M5型白血病細(xì)胞中都是特異性高表達(dá)的，而在非M5患者和健康對照中低表表或不表達(dá)。?

近年來，來源于白血病相關(guān)抗原的多肽疫苗已進(jìn)行了臨床實(shí)驗(yàn)，AML多肽疫苗有WT1多肽疫苗、RHAMM多肽疫苗等，這些多肽疫苗對AML主動(dòng)免疫治療有一定療效，但對M5患者是否為特異有效的疫苗，未行單獨(dú)研究。目前尚未見有應(yīng)用MLAA-34多肽疫苗免疫治療急性單核細(xì)胞白血病的報(bào)道。?