[發(fā)明專利]幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織的專用保存、運(yùn)輸培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410452903.3
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN105602849A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊寧敏
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州致遠(yuǎn)醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及攜帶有微生物的樣本的保存運(yùn)送技術(shù)，特別涉及到一種攜帶有幽門螺桿菌的樣本組織的保存、運(yùn)輸培養(yǎng)基。

(二)背景技術(shù)

幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，HP)是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤和胃癌等疾病的主要致病因素。1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(WHO/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原，是目前唯一被列為致癌因子的原核生物性病原微生物。由于其為微需氧菌，環(huán)境氧要求為5～8％，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下不能生存，生長營養(yǎng)條件較高，而普通培養(yǎng)基在保存或運(yùn)輸攜帶有幽門螺桿菌的樣品過程中會造成大量幽門螺桿菌的死亡，給臨床檢驗及相關(guān)疾病的研究帶來了極大不便。因此，對攜帶有幽門螺桿菌的樣本進(jìn)行正確保存、運(yùn)送成為了該微生物分離培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵。

目前市場上尚未有單獨針對攜帶有幽門螺桿菌的樣本的保存、運(yùn)送培養(yǎng)基，而常用的保存運(yùn)送培養(yǎng)基可保存運(yùn)送的菌種種類廣泛，且這類培養(yǎng)基在形態(tài)上多為固體或半固體瓊脂培養(yǎng)基，雖能在一定程度上保存樣本中微生物的活性，但依然存在易破碎、粘附性高、樣本中幽門螺桿菌存活率極低等缺點。導(dǎo)致樣品保存不完整，最終影響檢驗結(jié)果。

本發(fā)明不僅成功模擬了相似于感染人體體液的環(huán)境(pH值在7.35～7.45之間)，更有效抑制了其它微生物的污染，使得攜帶有幽門螺桿菌的樣本組織保存于這種保存、運(yùn)送培養(yǎng)基中，既能使組織保持活性，又能使存在于該組織內(nèi)的幽門螺桿菌維持在較高存活和繁殖的水平，明顯提高了檢驗的效率和準(zhǔn)確性。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了彌補(bǔ)針對幽門螺桿菌的樣本組織的保存、運(yùn)輸?shù)目瞻住Ｌ峁┝艘环N方法簡便，且對幽門螺桿菌檢存活率較高的保存、運(yùn)送攜帶有幽門螺桿菌的樣本的培養(yǎng)基。并對該培養(yǎng)基進(jìn)行了科學(xué)系統(tǒng)的生物學(xué)性能鑒定。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種幽門螺桿菌分離培養(yǎng)的樣本組織專用保存、運(yùn)送培養(yǎng)基。其特征為，由以下重量份數(shù)的原料配制而成：Na₂HPO₄.12H₂O(分析純)27～32份、NaH₂PO₄.H₂O(分析純)2～4份、蛋白胨8～12份、胰蛋白胨8～12份、葡萄糖0.5～1.5份、氯化鈉6～8份、亞硫酸鈉0.05～0.15份、其余為去離子水，共計1000份，無水碳酸氫鈉適量調(diào)節(jié)PH至7.4～7.6，高溫高壓后加入萬古霉素10‰份、兩性霉素5‰份。

其優(yōu)選的各原料的重量配比為：

Na₂HPO₄.12H₂O(AR)(分析純)29.04g、NaH₂PO₄.H₂O(分析純)2.62g、蛋白胨10g、胰蛋白胨10g、葡萄糖1g、氯化鈉7g、亞硫酸鈉0.1g、其余為去離子水，共計1000ml，無水碳酸氫鈉適量調(diào)節(jié)PH至7.4～7.6，高溫高壓后加入萬古霉素10mg、兩性霉素5mg。

本發(fā)明原料中的蛋白胨、胰胨、葡萄糖等物質(zhì)可給樣本組織提供保持活性的必需營養(yǎng)物質(zhì)，其中氯化鈉的含量為0.7％，為幽門螺桿菌存活的最佳滲透壓濃度，重亞硫酸鈉的水溶液還原性較強(qiáng)，可使幽門螺桿菌的局部環(huán)境為微需氧，有利于幽門螺桿菌生長繁殖。使用兩種抗生素的目的為抑制和殺滅在采集樣本過程中受到的其它微生物的污染，保證和提高樣品中幽門螺桿菌的存活率。

所述培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，配制原料中的各種物質(zhì)發(fā)揮各自的作用，達(dá)到既保存樣本組織自身的活性，又能使幽門螺桿菌在脫離機(jī)體后的組織中還能達(dá)到較好的存活。

(四)具體實施方式

實施例1

制備方法：

1、原材料干燥：

將Na₂HPO₄.12H₂O(分析純)、NaH₂PO₄.H₂O(分析純)、葡萄糖、氯化鈉、亞硫酸鈉和無水碳酸氫鈉分別置于不銹鋼盤中，放入80℃的烘箱中，烘烤至恒重。

2、稱量：

Na₂HPO₄2306g、NaH₂PO₄456g、蛋白胨2000g、胰蛋白胨2000g、葡萄糖200g、氯化鈉1400g、亞硫酸鈉20g、無水碳酸氫鈉約160g。