[發明專利]一種利用幼胚拯救實現小豆和飯豆遠緣雜交的方法

有效

• 申請號: 201410451976.0
• 申請日: 2014-09-05
• 公開（公告）號: CN104221861A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 劉長友;田靜;范保杰;曹志敏;蘇秋竹;張志肖;王彥
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院糧油作物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種利用幼胚拯救實現小豆和飯豆遠緣雜交的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)材料準備：母本選用較早熟的飯豆材料，父本選用綜合性狀優良的小豆品種，精選無病飽滿的籽粒以備種植；

2)材料種植：小豆親本分批錯期播種，以保證兩親本花期相遇并有足夠的花蕾進行雜交；

3)雜交授粉：當父母本均開花時，于每天下午4-6時進行去雄，第二天7-9時進行授粉；

4)幼胚拯救：取授粉后10-15天的雜交莢，用蒸餾水將雜交莢表面清洗干凈，用尖頭鑷子將其剝開，取幼嫩籽粒；將幼嫩的雜交籽粒用70％酒精滅菌1分鐘，0.1％升汞滅菌15分鐘，滅菌蒸餾水沖洗3-5次；在解剖鏡下剝取幼胚，將幼胚接種于裝有滅菌培養基的組培瓶中，其中培養基為添加10μM6-芐基腺嘌呤的MS基本培養基，以上整個操作過程在超凈工作臺中完成；接種好的幼胚轉移到光照培養箱中，培養條件為溫度25℃，濕度55-65％，12小時光照，12小時暗環境，直至雜種幼苗長出；

5)雜種幼苗移栽。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的母本為從播種至開花期為50-60天的飯豆材料，所述的父本為綜合性狀較好的吉林省小豆品種白紅2號。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述的母本為河北保定的較早熟的飯豆親本材料F021。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于小豆親本材料白紅2號分兩批錯期播種，第一批與飯豆材料同期播種，第二批錯后3-15天播種，以保證兩親本花期相遇并有足夠的花蕾進行雜交。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的雜交授粉的具體操作方法為選取第二天即將開放的花蕾，用酒精消毒過的尖頭鑷子剝開龍骨瓣，將10個花藥全部去除，僅留柱頭；去雄后將整個植株罩上防蟲網，以防昆蟲傳粉，授粉時選取當天剛開放的花朵，用尖頭鑷子將整個包含柱頭、花藥和花絲的龍骨瓣取下，從龍骨瓣細的開口一端將其套在母本的柱頭上。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的雜種幼苗移栽包括待幼苗長至8-12厘米高且生根良好時，打開培養瓶口，煉苗48小時；煉苗結束后小心地用鑷子將幼苗從組培瓶中取出，洗凈根上殘留的培養基，將其移栽到花盆中，將整個花盆用透光性好的聚乙烯袋罩上，以保持高濕環境，促進幼苗成活。