[發明專利]凝血因子Ⅷ質控品制備方法

有效

• 申請號: 201410449071.X
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104166004A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 孫盼;林方昭;馬莉;楊顯福;肖小璞;蘇娜;王憬惺
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院輸血研究所;成都協和生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N1/28
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發明涉及臨床凝血檢驗制劑的制備方法，具體凝血因子VIII質控品制備方法。?

背景技術

凝血因子VIII促凝活性測定適用于血友病A患者確診、血友病治療效果評估、其他出凝血疾病鑒別診斷以及各大采供血機構、血液制品廠凝血因子VIII濃縮制劑質量評價。用于凝血因子VIII促凝活性檢測的試劑、儀器較多，不同的試劑和檢測儀器、檢測原理各不相同，使用凝血因子VIII質控品對凝血因子VIII檢驗進行室內、室間質量控制非常重要。?

目前臨床實驗室使用的凝血質控物為多參數凝血質控品，其異常值凝血質控品包括凝血因子VIII在內的多個凝血因子均為異常水平，與病理樣本不同可能影響凝血因子VIII測定結果的準確性。?

國內凝血質控品幾乎被國外試劑壟斷，產品價格昂貴且水平單一，無法滿足臨床檢驗多活性水平的需求，因此，研發生產國內自主品牌的多個濃度水平的凝血因子VIII質控品有重大意義。?

發明內容

針對上述技術問題，本發明提供一種制備凝血因子VIII質控品的方法及獲得凝血因子VIII質控品。本發明方法制備的凝血因子VIII質控品為凝血因子VIII多個濃度水平，且其它凝血因子含量在正常范圍；該產品均一性和穩定性較好，滿足臨床對凝血因子VIII質控品的質量控制要求，可以更準確地監測病理樣本檢測結果的準確性。?

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：凝血因子VIII質控品制備方法，包括以下步驟：?

(1)將人靜脈采集的血液與抗凝劑以體積比為9∶1加入混合，在2℃～8℃條件下離心15分鐘，轉速2500rpm，分離吸取上層血漿，將多人份分離后的上層血漿混合，即得多人份混合血漿；抗凝劑為枸櫞酸三鈉溶液，其濃度為0.109mol/L。?

(2)每1000毫升多人份混合血漿中加入2～10克乙二胺四乙酸二鈉；37℃溫浴?1～2小時；?

(3)上述處理后血漿于透析液中2℃～8℃透析24小時，透析液為氯化鈉5～10g/L、咪唑2～5g/L，pH7.2；透析液與血漿體積比為50～100∶1，12小時換透析液一次；?

(4)透析后的血漿在2℃～8℃條件下離心30分鐘，轉速2500rpm，得到缺乏凝血因子VIII血漿；?

(5)將缺乏凝血因子VIII血漿與多人份混合血漿按照要求比例混合，即可制備成不同濃度水平的凝血因子VIII質控品。?

(6)將制備的凝血因子VIII質控品加入凍干保護劑，分裝，冷凍干燥。加入的凍干保護劑包括質量比例占凝血因子IX質控品的0.5～2％Hepes、1～5％甘氨酸、1～5％蔗糖。?

本發明制備的凝血因子VIII質控品，其產品均一性、穩定性及凍干品復融后穩定性好，可代替進口產品用于凝血因子VIII檢測的質量控制，有利于降低檢測成本，提高我國對凝血因子VIII檢測的能力。?

具體實施方式

結合實施例，進一步闡述本發明：?

實施例以制備活性為30％的凝血因子VIII質控品為例。?

(1)將人靜脈采集的血液與抗凝劑以體積比為9∶1加入混合，在2℃～8℃條件下離心15分鐘，轉速2500rpm，分離吸取上層血漿，將多人份血漿混合，即得多人份混合血漿；抗凝劑為枸櫞酸三鈉溶液，其濃度為0.109mol/L；?

(2)每1000毫升多人份混合血漿中加入2～10克乙二胺四乙酸二鈉；37℃溫浴1～2小時；?

(3)上述處理后血漿于透析液中2～8℃透析24小時，透析液為氯化鈉5～10g/L、咪唑2～5g/L，pH7.2；透析液與血漿體積比為50～100∶1，12小時換透析液一次；?

(4)透析后的血漿在2℃～8℃條件下離心30分鐘，轉速2500rpm，得到缺乏凝血因子VIII血漿；?

(5)將缺乏凝血因子VIII血漿與多人份混合血漿按照要求比例混合，即可制備成不同濃度水平的凝血因子VIII質控品。?

(6)將制備的凝血因子VIII質控品加入凍干保護劑，分裝，冷凍干燥。加入的?凍干保護劑包括1％Hepes、2％甘氨酸、2％蔗糖。?

產品性能檢驗測試：?

(1)產品活性檢測?

使用Sysmex?CA-1500全自動血凝儀及配套凝血因子VIII檢測試劑對實施例凝血因子VIII缺乏血漿凝血因子活性進行檢測。?

表1凝血因子VIII質控品的凝血因子活性測定表?