[發明專利]一種從沙棘葉中提取沙棘總黃酮的方法

在審

• 申請號: 201410445682.7
• 申請日: 2014-09-04
• 公開（公告）號: CN104189031A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 張金芳;楊存
• 申請（專利權）人: 南京標科生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61K127/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種從沙棘葉中提取沙棘總黃酮的方法，尤其涉及一種酶發酵協同連續逆流超聲波提取沙棘總黃酮的方法。

背景技術

沙棘是胡頹子科沙棘屬的一種野生漿果植物，又名醋柳、沙棗、黑刺，是世界上公認的珍貴食用和藥用植物。研究表明，高海拔地區的沙棘中黃酮類化合物含量較高，葉中黃酮類化合物主要以苷的形式存在，主要有異鼠李素、槲皮素、山奈酚和楊梅素等4種苷元及其苷類化合物，具有抗心肌缺血缺氧、抗心律失常、降低血清膽固醇和增強免疫等廣泛的藥理作用。

黃酮作為沙棘的最主要活性成分，常見的提取方法如下：水蒸氣蒸餾法、有機溶劑萃取法、超臨界二氧化碳萃取法、分子烙印技術等。這些方法均存在諸多不足；水蒸氣蒸餾法雖然設備簡單、成本低且對環境和人類無毒害而適宜工業化生產，但是提取率低、雜質含量較高，因此現在很少被人們利用；有機溶劑萃取法成本較高，存在溶劑殘留效應，對人類和環境有一定影響；超臨界二氧化碳萃取技術是一項新的分離、提取技術，具有低溫提取、無有毒殘溶和可以選擇性分離等特點，但是其用于沙棘黃酮的提取，原料要經過脫脂和脫色素等前期處理，檢測過程也比較繁雜；分子烙印技術是最近才發展起來的一種新技術，可制備槲皮素為模板的MIP，進行從沙棘初提物中提取黃酮實驗，實驗結果表明以槲皮素為模板的MIP可有效地從沙棘初提物中提取槲皮素和異鼠李素，但是這種方法成本太高，過程繁瑣，現在還處于實驗室摸索階段。

經文獻檢索，未見采用酶發酵與連續逆流超聲相結合提取沙棘總黃酮的文獻報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種從沙棘葉中提取沙棘總黃酮的方法，該方法具有工藝簡單、易操作、提取時間短、提取率高、對環境友好等優點。

本發明包括以下步驟：

a.沙棘葉于60℃烘干、粉碎，過40目篩；

b.向上述原料中加入原料重量1~2%的生物酶，攪拌均勻，再噴灑pH4.0~5.0的檸檬酸/檸檬酸鈉的緩沖溶液，使原料達到手握成團即可，于40~50℃發酵5~7天；?

c.將發酵好的原料置于頻率為40kHz的連續逆流超聲波提取器中，加入5~7倍的60~80%的乙醇溶液，控溫在45~60℃，提取90~120min，過濾，得濾液；

d.將步驟c中的濾液濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:4~8、粒徑為80~100目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用4~8BV的60~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得沙棘總黃酮。

步驟b中所述的生物酶為重量比0.7:0.3的纖維素酶和果膠酶的混合物，酶的活力單位為5000U/g。

本發明與現有技術相比，具有以下優點：

（1）總黃酮含量和收率較高：本發明采用生物酶發酵，破壞細胞壁的致密結構，在結合超聲波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了總黃酮的提取率，通過連續逆流可實現連續作業；

（2）本發明采用聚酰胺樹脂進行分離純化，該樹脂重復利用率高，價格便宜，適用于工業生產。

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式：

實施例1：

沙棘葉于60℃烘干、粉碎，過40目篩，取100g粉末，加入原料重量1%的纖維素酶和果膠酶（重量比為0.7:0.3，酶的活力單位為5000U/g）的混合酶，攪拌均勻，再噴灑pH4.0的檸檬酸/檸檬酸鈉的緩沖溶液，使原料達到手握成團即可，于40℃發酵5天；將發酵好的原料置于頻率為40kHz的連續逆流超聲波提取器中，加入5倍的60%的乙醇溶液，控溫在45℃，提取90min，過濾，得濾液；將濾液濃縮至無醇味，轉入徑高比為1:4、粒徑為80目的聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫除去雜質，后用4BV的60%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥至恒重，即得沙棘總黃酮提取物1.85g，經UV檢測，總黃酮含量為51.2%。

實施例2：