[發(fā)明專利]一種利用HPLC同時測定茶葉中17種特征成分的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410445283.0
• 申請日: 2014-09-03
• 公開（公告）號: CN104330482A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉英;許亞新;吳丹;吳廣紅;尹州
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州市余杭區(qū)質(zhì)量計量監(jiān)測中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種茶葉的檢測方法，具體涉及一種利用HPLC同時測定茶葉中有機(jī)酸、兒茶素、黃酮和咖啡因等17種特征成分的方法。

背景技術(shù)

茶葉中含有豐富的多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、有機(jī)酸和生物堿，它們是茶葉中重要的生物活性物質(zhì)。多酚類物質(zhì)中以兒茶素含量最高，含量約占茶多酚總量的70％左右，具有抗氧化和清除自由基的作用。茶葉中黃酮以槲皮素、山奈酚、楊梅素及其苷類為主。茶葉中的有機(jī)酸是香氣和滋味的主要成分之一，參與茶樹的新陳代謝，常為糖類分解的中間產(chǎn)物，種類較多，含量為干物質(zhì)總量的3％左右。生物堿是茶樹重要的代謝產(chǎn)物，其中咖啡堿占主體。

這四大類物質(zhì)在茶葉保健功效中的具有重要作用，對其化合物分離和含量測定的報道也很多。

例如，公開號為CN?103743703A的中國發(fā)明專利申請文獻(xiàn)公開了一種采用近紅外光譜快速檢測茶葉中主要成分的方法，包含以下步驟：(1)茶葉樣本的準(zhǔn)備：收集了茶葉樣品，編號后，裝在鋁箔樣品袋中；密封冷藏；(2)近紅外光譜的采集：基于Workflow設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)工作流程(SOP)和分析方法，采集茶葉樣品漫反射光譜圖；(3)漫反射光譜光譜預(yù)處理：對光譜圖進(jìn)行“一階或二階導(dǎo)數(shù)+Norris濾噪”處理；(4)模型的建立：使用專門的化學(xué)計量學(xué)軟件，建立起近紅外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)方法對同一樣品測量出了的數(shù)據(jù)之間的數(shù)學(xué)模型；(5)模型的驗證：按照與第2步完全相同的方法，在近紅外儀器上測量新的茶葉樣品，并用第4步建立好的模型進(jìn)行測量，與按照國標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)方法測量的結(jié)果進(jìn)行比較。

公開號CN103033578A的中國發(fā)明專利申請文獻(xiàn)公開了一種基于內(nèi)含成分的快速初篩茶樹優(yōu)異資源的方法，是取生長條件與生長勢基本一致的茶樹芽頭第一片展開葉，用液氮冷凍處理后，將葉片搗碎，直接以甲醇快速提取，離心，取上清液，利用高效液相色譜檢測茶葉中內(nèi)含成分，比較各內(nèi)含成分含量，從中初步篩選優(yōu)異茶樹種質(zhì)資源，在此基礎(chǔ)之上，采用已知方法對初篩的優(yōu)異種質(zhì)資源進(jìn)一步進(jìn)行復(fù)篩。

高效液相色譜法(HPLC)由于具有分離效能高、分析速度快等優(yōu)點，在茶葉有效成分的分離檢測中應(yīng)用較多，但目前還沒有相關(guān)報道同時檢測茶葉中四大類相關(guān)物質(zhì)10多種成分的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種利用HPLC同時測定茶葉中17種特征成分的方法，以茶葉中有機(jī)酸、兒茶素、黃酮和咖啡堿為研究對象，選取17種特征成分(沒食子酸、原兒茶酸、阿魏酸、香草酸、對香豆酸、芥子酸、對羥基苯甲酸苯甲酸、沒食子酸兒茶素(GC)、兒茶素(C)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、槲皮素、山奈素和咖啡因(CAF))，利用HPLC法同時測定，達(dá)到四類物質(zhì)同時分離的目的。

一種利用HPLC同時測定茶葉中17種特征成分的方法，包括：

采用高效液相色譜二級陣列管檢測法同時測定茶葉中的17種特征成分，根據(jù)所述17種特征成分各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到茶葉樣品中該17種特征成分的含量；所述高效液相色譜二級陣列管檢測法的條件為：采用Hypersil?GOLD?PFP色譜柱，柱溫為31～33℃，以甲醇和1％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，檢測波長為280～285nm；

所述17種特征成分為：沒食子酸、原兒茶酸、沒食子酸兒茶素、對羥基苯甲酸、香草酸、兒茶素、表沒食子兒茶素、咖啡因、對香豆酸、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸、沒食子兒茶素沒食子酸酯、芥子酸、表兒茶素沒食子酸酯、槲皮素和山奈素。

本發(fā)明流動相優(yōu)選為甲醇和1％甲酸水溶液。

色譜柱主要是硅膠基質(zhì)，低pH值能幫助抑制硅羥基的活性，減小拖尾，從而改善峰形，提高分離度。在分析有機(jī)酸時，pH值低于3時，色譜柱較穩(wěn)定，出峰效果較好。本發(fā)明在研究時對比了0.1％甲酸(pH2.65)和1％甲酸(pH2.10)作為流動相對分離效果的影響。0.1％甲酸與甲醇作流動相時，EGC和咖啡因難分離，且部分峰有前拖尾現(xiàn)象；1％甲酸作流動相時，分離效果比較好，無拖尾現(xiàn)象(如圖2所示)。乙腈和甲醇對分離度的影響也不同，乙腈作流動相時，兒茶素與EGC不能分離，且有機(jī)酸出峰太早，甲醇作流動相時，17種物質(zhì)均能分離。因此，本發(fā)明優(yōu)選甲醇和1％甲酸水溶液作為流動相。

作為優(yōu)選，梯度洗脫過程如表1所示，流動相中甲醇的濃度分別為：