[發明專利]一種洪湖碘泡蟲特異性PCR檢測引物及其檢測方法

有效

• 申請號: 201410444476.4
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104164515A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 習丙文;謝駿;梁利國
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅

1.一種洪湖碘泡蟲特異性PCR檢測引物，其特征是：包括正向引物和反向引物；正向引物F：5’-TCGCTCAGGGTGTAATG-3’；反向引物R：5’-ATGAGGCAGCGTAAAGG-3’。

2.權利要求1所述洪湖碘泡蟲特異性PCR檢測引物的檢測方法，其特征是步驟為：以18S?rDNA序列為靶基因，通過PCR方法，以待檢樣品DNA為模板，以權力要求1中核苷酸序列為引物擴增靶基因，檢測是否存在擴增產物，有則表明檢測結果為陽性；

具體步驟為：

（1）洪湖碘泡蟲的DNA提取：采用Ezup柱式動物基因組DNA抽提試劑盒提取洪湖碘泡蟲的DNA，溶解在50?μL、pH7.8的TE緩沖液中，置于-20℃保存備用；

（2）PCR反應：在200μL的反應管中加入10×PCR?buffer，其中含Mg²⁺?2.5?μL，2.5mmol/L的dNTP?2.0?μL，5?U/μL的rTaq酶0.2μL，10μmol/L的正向引物F?0.5-1μL,?10?μmol/L的引物R?0.5-1μL；

PCR檢測反應程序為：94℃預變性3min；30個循環，94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸45s；72℃延伸7min，最后降溫至4-12℃；

（3）電泳檢測：取5-10μL?PCR檢測產物，以1.5%瓊脂糖進行凝膠電泳檢測，電壓100-140V，TAE電泳緩沖液中含Tris堿0.04mol/L，EDTA?2mM/L。