[發明專利]水稻OsSRFP1基因的抗冷性基因工程應用

有效

• 申請號: 201410444392.0
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104195168B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 黃驥;張紅生;方慧敏;唐海娟;鮑永美;王州飛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司32218
• 代理人: 傅婷婷,徐冬濤

1.cDNA序列如SEQ?ID?NO.1所示的E3泛素連接酶基因OsSRFP1的抗冷性基因工程應用，其特征在于抑制所述的E3泛素連接酶基因OsSRFP1的表達，能夠提高水稻的抗冷性。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于將針對E3泛素連接酶基因OsSRFP1的RNAi載體導入水稻，抑制所述的E3泛素連接酶基因OsSRFP1的表達，能夠提高水稻的抗冷性。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的針對E3泛素連接酶基因OsSRFP1的RNAi載體通過以下方法構建：選取了OsSRFP1基因中位于SEQ?ID?NO.1的第518到730位，長度為213bp的特異核苷酸序列作為干涉載體插入區段，以質粒pMD18T-OsSRFP1的DNA為模板,利用引物RNAi-ZFIP1F1：SEQ?ID?NO.8、RNAi-ZFIP1R1：SEQ?ID?NO.9進行PCR擴增，通過BamH?Ⅰ和Kpn?Ⅰ酶切位點將擴增的目的片段反向插入pTCK303植物干涉表達載體；同時以質粒pMD18T-OsSRFP1的DNA為模板,利用引物RNAi-ZFIP1F2：SEQ?ID?NO.10、RNAi-ZFIP1R2：SEQ?ID?NO.11進行PCR擴增,通過Sac?Ⅰ和Spe?Ⅰ酶切位點將擴增的目的片段正向插入pTCK303植物干涉表達載體，從而獲得該基因的干涉表達載體。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述的質粒pMD18T-OsSRFP1通過以下方法獲得：

1)選用水稻品種“中花11”，待水稻幼苗長至3葉期后，用4℃進行處理，5～8小時后立即取葉片抽提總RNA，以獲得的總RNA為模板,按照美國Promega公司提供的反轉錄試劑盒的說明書進行反轉錄，合成cDNA第一鏈；

2)以上一步合成的cDNA第一鏈為模板，以引物F1：SEQ?ID?NO.2?SEQ?ID?NO.2和引物F2：SEQ?ID?NO.3通過PCR擴增獲得E3泛素連接酶基因OsSRFP1I的cDNA，將其克隆至pMD18-T載體，獲得質粒pMD18T-OsSRFP1。