[發(fā)明專利]一種阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410443487.0
• 申請日: 2014-08-29
• 公開（公告）號: CN104297361A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張光憲;丁兆;孫朝國;胡剛
• 申請（專利權(quán)）人: 四川匯宇制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雜質(zhì)的檢測方法，特別涉及一種阿扎胞苷中四乙酰核糖的檢測方法。?

背景技術(shù)

阿扎胞苷，英文名稱Azacitidine，化學(xué)名為1-(β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1,3,5-三嗪-2(1H)-酮，又名5-氮雜胞苷，其結(jié)構(gòu)式如下：?

阿扎胞苷為胞嘧啶核苷類藥物。能直接摻入DNA中，抑制DNA和RNA合成，可殺傷處于S期的細胞。美國FDA最早于2004年5月批準Celgene?corp上市該藥，商品名為:Vidaza，主要用于治療骨髓增生異常綜合癥，急性非淋巴細胞性白血病。?

四乙酰核糖是合成阿扎胞苷常用的原料之一，在合成的阿扎胞苷中可能存在四乙酰核糖雜質(zhì)。雜質(zhì)檢測是控制藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。藥物純度對病人的影響是非常大的。注射藥物不純是引起藥物不良反應(yīng)(如過敏、藥物熱等)的主要原因。口服藥物不純，可能增加不良反應(yīng)的發(fā)生率，如惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等。同時，可能影響的是藥物的吸收，從而影響藥物療效。因此，藥物雜質(zhì)的檢測方法就顯的尤為重要。?

目前，美國藥典36版(USP36)所記載的阿扎胞苷原料中雜質(zhì)的檢測方法，?采用高效液相色譜法，采用流動相為1.54g/L乙酸銨水溶液和乙腈，進行梯度洗脫，柱溫為10℃，洗脫時間為82min，檢測波長為242nm。該方法不能用于檢測阿扎胞苷中四乙酰核糖，即使選用四乙酰核糖的最大吸收波長210nm為檢測波長，其它條件不改變，也不能檢測出阿扎胞苷中的四乙酰核糖。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的上述不足，提供一種阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的檢測方法，該方法能檢測出阿扎胞苷中四乙酰核糖，具有靈敏度高，準確度高，雜質(zhì)峰形對稱性好，柱效高的優(yōu)點。?

為了達到上述目的，具體技術(shù)方案如下：?

一種阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的檢測方法，采用高效液相色譜法，選用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以水-甲醇為流動相進行等度洗脫，流速為0.8-1.2mL/min，柱溫25-35℃，樣品的檢測波長為205nm到215nm；?

USP36中選用柱溫為10℃，溫度偏低，導(dǎo)致柱壓偏高，會降低色譜柱的使用壽命，同時不易控制。本發(fā)明選用的柱溫是25℃-35℃，溫度接近室溫，柱壓低，容易控制。四乙酰核糖在205nm-215nm具有很好的吸收。?

所述的流動相進行等度洗脫，其中，甲醇的體積百分比為30-45％。本發(fā)明選用的流動相條件，洗脫時間短，雜質(zhì)峰和主峰充分分離。如果只選用水作為流動相，檢測時間會很長；如果只選用甲醇作為流動相，雜質(zhì)峰與主峰無法分離。?

優(yōu)選的，阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的檢測方法，采用高效液相色譜法，選用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以水-甲醇為流動相進行等度洗脫，流速為1.0mL/min，柱溫30℃，樣品的檢測波長為210nm；四乙酰核糖的最大吸收波長為210nm，選用最大吸收波長進行檢測，有利于提高檢測結(jié)果的準確度。?

優(yōu)選的，所述的流動相進行等度洗脫，其中，甲醇的體積百分比為35％。該條件下洗脫，10min就能出雜質(zhì)峰，并且雜質(zhì)峰和主峰分離效果好。?

所述的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱填料的顆粒度為5μm，規(guī)格為150mm×4.6mm。?

所述的阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的檢測方法，洗脫時間為20min。USP36中雜質(zhì)檢測方法，洗脫時間為82min。本發(fā)明中的洗脫時間只需要20min。節(jié)省時間的同時，具有很好的雜質(zhì)四乙酰核糖檢測效果。?

所述的樣品為0.5-10mg/mL的阿扎胞苷水溶液。?

量取所述的阿扎胞苷水溶液50μL，進行測定。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：?

(1)本發(fā)明中的檢測方法可以用于準確檢測阿扎胞苷中雜質(zhì)四乙酰核糖。?

(2)本發(fā)明中的流動相為常用溶劑，同時采用等度洗脫，方法簡單易操作。洗脫時間只需要20min，就能得到很好的檢測結(jié)果，檢測效率高。?

(3)采用本發(fā)明中的方法進行檢測，分離度達到4以上，通常分離度大于2，雜質(zhì)峰和主峰就能夠很好分離，分離度越大，效果越好。拖尾因子接近1，峰形對稱性好。理論塔板數(shù)大于5000，柱效高。?

附圖說明：

圖1為實施例1高效液相色譜圖。?

圖2為實施例3高效液相色譜圖。?

圖3為對比例1高效液相色譜圖。?

具體實施方式