[發明專利]高內涵圖像流式生物顯微分析方法

有效

• 申請號: 201410443405.2
• 申請日: 2014-09-02
• 公開（公告）號: CN104266956A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 胡潔;戚進;劉超
• 申請（專利權）人: 上海凱度機電科技有限公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N21/64
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：搭建高內涵圖像流式生物顯微分析系統；

步驟2：利用所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統對細胞進行檢測；

其中，所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統包括液流系統、光學系統；

液流系統包括流動室，流動室用于接收注入的樣本細胞懸液和系統鞘液中，并使樣本細胞懸液中的細胞在系統鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個流過流動室的檢測窗口；

光學系統包括光源、光路系統、濾光片堆棧；

所述光源，用于照射通過檢測窗口的細胞，從而產生光信號；光源包括用于產生明場細胞圖像的鹵素燈、用于產生熒光細胞圖像的激光器；

光源照射細胞產生的光信號被物鏡收集，通過兩組楔形光柵分別收集前向光信號、側向光信號到兩個TDI相機中，然后通過光路系統傳遞到主要由多個二向色鏡構成的濾光片堆棧，光信號在濾光片堆棧處被分成不同波段投射到一個六通道PMT陣列上；進而所述光學系統產生一個明場細胞圖像，一個六通道熒光細胞圖像及六個不同波段的PMT光強信號。

2.根據權利要求1所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統還包括激光補光裝置，其中，所述激光補光裝置用于通過在細胞側向補光來調整光強度，降低TDI相機延遲積分的時間，減少細胞的高速流動帶來的積分時間過短造成光強偏弱的缺陷。

3.根據權利要求1所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統還包括自動對焦裝置，其中，所述自動對焦裝置用于利用激光光點法，通過測量彌散斑的邊緣和尺寸來計算細胞的聚焦位置。

4.根據權利要求1所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統還包括速度測量裝置，其中，所述速度測量裝置用于利用激光測距來測定限定時間內細胞的運動距離，折算出細胞的運動速率，所述TDI相機根據細胞的運動速率捕獲在流動室內的單細胞的圖像。

5.根據權利要求1所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述高內涵圖像流式生物顯微分析系統還包括分析系統，其中，所述分析系統采用熒光和明場的圖像配準方式，校正熒光和明場的成像偏差，使得光斑中心重合，并且通過多光譜PMT光信號和多光譜的熒光圖像來校正圖像的熒光強度，使得輸出的熒光強度與PMT保持一致。

6.根據權利要求5所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述分析系統通過PMT光信號來調節熒光圖像的分割閾值，并且通過圖像微觀結構的分析來確定大量細胞中的異常細胞。

7.根據權利要求1所述的高內涵圖像流式生物顯微分析方法，其特征在于，所述物鏡的孔徑數值NA大于0.75。