[發明專利]特異探測膀胱癌細胞的分子遺傳裝置的構建方法有效
| 申請號： | 201410441470.1 | 申請日： | 2014-09-01 |
| 公開（公告）號： | CN104293819B | 公開（公告）日： | 2017-01-04 |
| 發明（設計）人： | 黃衛人;劉宇辰;蔡志明 | 申請（專利權）人： | 深圳市第二人民醫院 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司44281 | 代理人： | 向武橋,彭家恩 |
| 地址： | 518035 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 特異 探測 膀胱 癌細胞 分子 遺傳 裝置 構建 方法 | ||
1.一種特異探測膀胱癌細胞的分子遺傳裝置的構建方法，所述其特征在于，包括：
構建質粒hUPII-pSpCas9；
構建質粒hTERT-gRNA-BAM；
構建質粒pRL-SV40-LacI；
構建質粒pcDNA3-LacO-hRluc；
構建質粒pcDNA3-LacO-E-cadherin。
2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，
將hUPII啟動子片段插入質粒Cbh-3X-FLAG-NLS-SpCas9-NLS的XbaI/AgeI位點，而構建所述質粒hUPII-pSpCas9；
將hTERT啟動子和核酸酶序列圍繞的引導RNA分子分別插入質粒pCMVp-NEO-BAM的XbaI/Sal?I和Sal?I/BamH?I位點，而構建所述質粒hTERT-gRNA-BAM；
將lacI基因序列插入質粒pRL-SV40的NheI/XbaI位點，而構建所述質粒pRL-SV40-LacI；
將lac操縱子序列和hRluc基因分別插入質粒pcDNA3的HindIII/Kpn?I和BamH?I/EcoR?I位點，而構建所述質粒pcDNA3-LacO-hRluc；
將人E-cadherin?cDNA序列插入pcDNA3-LacO-hRluc的BamH?I/EcoR?I位點，而構建所述質粒pcDNA3-LacO-E-cadherin。
3.如權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述lacI基因序列如SEQ?ID?NO:1所示。
4.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述膀胱癌細胞如T24、5637、J82或SW-780。
5.一種權利要求1所述構建方法構建的分子遺傳裝置在特異探測膀胱癌細胞試劑盒中的應用。
6.一種權利要求1所述構建方法構建的分子遺傳裝置在抑制膀胱癌細胞藥物中的應用。
7.一種權利要求1所述構建方法構建的分子遺傳裝置在膀胱癌細胞中特異表達效應基因上的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述效應基因是luciferase基因或E-cadherin基因。
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