[發明專利]IGF-1基因啟動子區微衛星多態性的檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201410439642.1
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN104164432A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 劉蕊;胡麗玲;吳萍;趙立杰;許丹丹
• 申請（專利權）人: 天津市人民醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

技術領域

?本發明涉及一種IGF-1基因啟動子區微衛星多態性的檢測試劑盒。本試劑盒能對IGF-1基因啟動子區微衛星既（CA）重復序列多態性進行檢測，尤其可以檢測出(CA)重復次數為(19)和(CA)重復次數為非19，以及(CA)重復次數為19的純合子和雜合子?？梢杂糜谔悄虿』颊甙殡S結直腸癌發生的輔助診斷，糖尿病患者臨床用藥的評估等研究領域。

背景技術

結直腸癌(Colorectal?cancer，CRC)作為最常見的消化道腫瘤之一，在癌癥發病率中所占比例高達9%，發病率和死亡率分別居所有癌癥的第三位和第四位。其很多研究者也將目光鎖定在其研究機制上，流行病學研究發現，糖尿?。―iabetes?mellitus,DM）與包括結直腸癌在內的多種惡性腫瘤的發病密切相關。且長期接受胰島素治療患者該病發生的危險性增加2-3倍。

關于DM患者伴CRC發生風險增加的機制，有人提出了胰島素-胰島素樣生長因子（IGF）軸學說，即血清異常增高的胰島素水平可通過胰島素-IGF-1軸促進結直腸上皮細胞增殖轉化、抑制細胞凋亡導致CRC的發生。而大量研究報道，“高胰島素血癥”及高濃度的IGF-l會增加CRC的發生風險，有meta分析表明IGF-1濃度與大腸癌的發生風險正相關，總OR=1.56?(?95％CI：1.14-2.13)，血清高水平IGF-1?是大腸癌的獨立危險因子。

國外研究報道表明血清IGF-1水平與IGF-1基因啟動子CA重復序列有關，IGF-1基因啟動子上游約1kb處一段含有11-23個CA重復的多態性微衛星片段，其中19次CA重復的等位基因頻率最高，被認為是野生型等位基因。攜帶(CA)19/19的IGF-1濃度低于其雜合子基因型及其它基因型，所以CA重復次數與IGF-1的濃度相關。有學說認為高胰島素血癥可以通過胰島素-IGF-1軸促進結直腸上皮細胞增殖轉化、抑制細胞凋亡導致CRC的發生，所以非攜帶(CA)19/19的基因型可能是易受胰島素影響而導致結直腸癌發生的高?；蛐?。既攜帶非(CA)19/19的基因型的糖尿病患伴結直腸癌發生的風險會明顯，該基因型可能是易于發生結直腸癌的胰島素敏感基因型，所以在臨床上明確糖尿病患者IGF-1基因啟動子（CA）重復序列多態性，確定其基因型，可以對攜帶胰島素敏感基因型的糖尿病患者在使用胰島素上進行評估，為其提供個性化的治療方案，降低該類糖尿病患者伴結直腸癌發生的風險。所以（CA）重復序列多態性的檢測對于避免糖尿病患者伴結直腸癌發生至關重要。

關于（CA）重復序列多態性的檢測方法，目前較常用的方法是測序的方法，但是該方法的價格比較昂貴，不適合醫院廣泛開展，因此必須尋找一種應用簡單、結果可靠、

價格低廉的，且適合臨床開展的技術來開發IGF-1基因啟動子區?(CA）重復序列多態性檢測試劑盒以解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測IGF-1基因啟動子區?(CA）重復序列多態性的試劑盒，以便篩查出糖尿病受試者的基因型是否是易受胰島素刺激而誘發結直腸癌的高?；蛐?，可以用于糖尿病患者伴隨結直腸癌發生的早期輔助診斷，以及糖尿病患者臨床使用藥的評估等研究領域。

我們經過與測序等方法的對比評估，選擇了PCR-單核苷酸構象多態性技術。

PCR-單核苷酸構象多態性技術是一種直接檢測基因突變的分子生物學技術，具有靈敏度高，特異性好，簡便，廉價等優點。本發明采用PCR技術，根據單鏈DNA構象差別，即長度不同或單個核苷酸不同的單鏈DNA片段空間構象不同，當其在非變性聚丙烯酰胺凝膠中進行電泳時，電泳的位置會不同，根據電泳DNA?marker分析不同受試者的基因型。本發明涉及的試劑盒可以廣泛用于糖尿病患者（CA）重復序列多態性檢測，提高檢測的可重復性和準確性，更準確的篩查出易受方案，可以大大地降低醫療成本和費用，減少醫療資源的浪費，對部分患者胰島素使用進行評估，為其提供個性化的治療方案，降低其結直腸癌發病風險，提高患者生存質量。

本發明在對GENBANK?上所有已知的IGF-1啟動子核酸序列進行比對的基礎上，最后選定GENBANK數據庫的序列NC_012920為模板設計引物，該引物在含有耐熱DNA?聚合酶、高質量的脫氧糖核苷三磷酸(dNTPs)?以及Mg2+?等的PCR?反應緩沖液中能實現體外擴增出特異性強含?(CA）重復序列大小為150bp左右的擴增產物，擴增物的特異性和準確度經瓊脂糖凝膠電泳驗證后，將在非變性的聚丙烯酰胺凝膠通過電泳條帶位置和數目實現對?(CA）重復序列多態性的檢測。