[發明專利]高效抑藻活性化合物Deinoxanthin及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410437123.1
• 申請日: 2014-08-29
• 公開（公告）號: CN104152389B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發明（設計）人: 鄭天凌;李祎;朱紅;張化俊;鄭偉
• 申請（專利權）人: 廈門大學;廈門大學深圳研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P23/00;C07C49/743;C07C45/78;A01N35/06;A01P13/00;C12R1/01
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙)35200
• 代理人: 馬應森

1.耐輻射球菌(Deinococcus?xianganensis)Y35，已于2014年06月29日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏中心保藏編號為：CCTCC?NO：M2014296。

2.高效抑藻活性化合物Deinoxanthin，其特征在于，其分子式為C₄₀H₅₄O₃，名稱為Deinoxanthin，結構式如下所示：

3.如權利要求2所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin的制備方法，其特征在于，

包括以下步驟：

1)將耐輻射球菌(Deinococcus?xianganensis)Y35接種于平板上劃線分離，培養后挑取所述平板上的單菌落接種于蒸餾水配制的LB液體培養基中，再培養后即得發酵液；

2)將步驟1)得到的發酵液離心后去掉上清液，所得紅色菌體用無水乙醇萃取，超聲振蕩，再次離心；

3)將步驟2)所得的上清液真空蒸干，加入乙酸乙酯萃取過夜，減壓濃縮，干燥，得到粗提取物A；

4)將步驟3)所得的粗提物A溶于甲醇中，然后上樣于葡聚糖凝膠柱，采用甲醇為流動相洗脫，在洗脫過程中，根據顏色不同收集洗脫液，并將洗脫液利用薄層層析進行層析，展開劑按體積比的組成為二氯甲烷∶甲醇＝20∶1，采用碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液；

5)將步驟4)所得的合并洗脫液真空蒸干，然后溶解于DMSO進行抑藻活性驗證，選取經驗證后具有抑藻活性的組分，記為組分B；

6)將步驟5)所得的組分B溶于乙酸乙酯中，然后上樣于硅膠柱，采用流動相梯度濃度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合物，洗脫程序為體積比50∶1，黃色、紅色雜質，30∶1，第一片紅色組分，15∶1，第二片紅色組分，洗脫流速為1mL/min；在洗脫過程中，間隔收集洗脫液，并將洗脫液進行層析，采用碘蒸氣顯色和硫酸銨乙醇顯色，然后合并相似組分，得到合并洗脫液，然后將合并洗脫液真空蒸干，再溶解于DMSO驗證抑藻活性，選取經驗證后具有抑藻活性的組分，記為活性組分C；

7)將步驟6)所得的活性組分C利用高效液相色譜分析，分析柱SunFireTm?C18?5μm；流動相按體積比為甲醇∶乙腈∶水＝5∶4∶1，流速為1mL/min，柱溫為35℃，檢測波長為480nm，每次進樣量為20μl；在HPLC結果中，樣品只檢測到一個獨立的峰，所得化合物即為所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin，結構式為：

4.如權利要求3所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin的制備方法，其特征在于，

在步驟1)中，所述培養的條件是于28～37℃溫度下培養2～3d；所述再培養的條件可于28～37℃，180～250rpm培養2～3d；

在步驟2)中，所述離心的條件可于12000～14000g離心10～20min；所述超聲振蕩的時間可為2～4h，所述再次離心的條件可于12000～14000g離心10～20min。

5.如權利要求3所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin的制備方法，其特征在于，

在步驟3)中，所述上清液真空蒸干的條件是將上清液置于旋轉蒸發儀下30℃真空蒸干，所述乙酸乙酯的加入量可為200～400mL；

在步驟4)中，所述葡聚糖凝膠柱可采用Sephadex?LH-20葡聚糖凝膠柱。

6.如權利要求3所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin的制備方法，其特征在于，

在步驟5)中，所述合并洗脫液真空蒸干的條件是將合并洗脫液置于旋轉蒸發儀下30℃真空蒸干；

在步驟6)中，所述硅膠柱可采用170mm×30mm，200～300目硅膠柱；所述合并洗脫液真空蒸干的條件可將合并洗脫液置于旋轉蒸發儀30℃真空蒸干。

7.如權利要求3所述高效抑藻活性化合物Deinoxanthin的制備方法，其特征在于，

在步驟7)中，所述分析柱SunFireTm?C18?5μm為4.6mm×250mm?Column。